단백질정성

소개

단백질정성 실험입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ninhydrin test
Biuret test
빛의 흡수
분광광도법

Ⅱ. Material & Methods
1. 준비물
2. 방법

Ⅲ. Results
1. Ninhydrin test
2. Biuret test

Ⅳ. Discussion

Ⅴ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction
Ninhydrin test
이 반응은 a-아미노기를 가진 화합물이 나타내는 정색반응으로 a-아미노산, peptide, 단백질들 뿐만 아니라 amine류, 또는 암모니아들도 이 반응에 양성이다. 이 반응은 매우 예민하기 때문에 아미노산 및 단백질의 확인에 널리 이용될 뿐만 아니라, 이들의 정량에도 이용된다. 단백질용액 2ml에 중성 또는 미약산성에서 1% ninhydrindyddor을 1~2뱡울 가하고 수욕상에서 2~3분간 가열하면 적자색 또는 청자색을 나타낸다. 프롤린(proline)을 제외한 아미노산은 청자색 생성물인 루헤만 자색(Ruhemann`s purple)을 나타낸다. 프롤린이나 하이드록시프롤린(hydroxyproline)의 경우에는 노란색을 나타낸다.

Biuret test
뷰렛반응 시약 제조하는 방법은 다음과 같다. 1L들이 부피 플라스크에 황산구나 2.5g을 넣고 눈금선 까지 증류수를 채워 0.01M의 황산구리 수용액을 만든다. 또 다른 부피 플라스크에는 수산화나트륨 440g을 넣고 마찬가지로 눈금선 까지 증류수를 채워 10M의 수산화나트륨수용액 1L를 만든다. 반응을 진행하기 전에 수산화나트륨 수용액 1L와 황산구리 수용액
약 25ml를 섞어 뷰렛시약을 만들어 사용한다. 간단하게는 5% 수산화나트륨 용액과 1% 황산구리 수용액을 각각 몇 방울씩 시료에 떨어뜨려 검사하기도 한다. 두 용액을 미리 섞어 두면 반응이 일어나므로 검출 직전에 혼합하여 사용하는 것이 좋다.
뷰렛반응의 원리는 다음과 같다. 뷰렛반응 시약 속에는 2가의 구리이온이 들어 있기 때문에 푸른색을 띤다. 시약이 단백질과 만나면 보라색으로 색이 변하는 성질을 이용하여 단백질의 검출에 사용한다. 색이 변하는 이유는 펩티드결합이 두 개 이상 존재하는 구조를 뷰렛이라 하는데, 이 뷰렛 구조가 2가의 구리 이온과 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하기 때문이다. 모든 단백질은 기본적으로 무수히 많은 펩티드결합으로 이루어져 있기 때문에, 뷰렛반응으로 검출할 수 있다. 단백질 뿐 아니라 단 몇 개의 펩티드 결합을 가지고 있는 펩티드도 검출할 수 있다.

참고자료

· Daniel C. Harris, 분석화학, 자유아카데미, 2001, pp575-581
· 이준우, 최신분석화학, 신광문화사, 1999, pp266-279
· Lubert Stryer, 생화학, 서울외국서적, 1999, p351-354