FPLC

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2012.09.16
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2004.09
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FPLC에 대한 조사내용

목차

1. 소개

2. 장치구성

3. 조작

4. HPLC와FPLC비교

본문내용

FPCL(fast protein liquid chromatography)

* FPCL은 단백질, 핵사, 당질등의 고분자 물질의 분리를 목적으로 개발된 전자동식 분리장치로 독자적인 흡착제를 사용하고 있다. FPLC는 HPLC와 동일한 원리로 운영되며, 이동상이 액체 (주로 수용상 완충액)이고 분석물질은 주로 단백질과 같은 고분자전용 액체 크로마토그래피이다. HPLC가 소량의 시료를 고압에서 분리함에 비하여 FPLC는 수백 mL에 상당하는 다량의 시료로부터 다양한 column을 이용하여 고분자 물질을 분리, 분취하는 목적이 있다. 고압의 펌프를 이용하여 시료를 빠른 유속으로 컬럼을 통과시키면 컬럼내의 bead와 시료의 물질들과의 친화도의 차이에 의하여 시료가 분리된다. 이렇게 분리된 단백질은 UV검출기를 이용하여 검출하며, Fraction collector로 분획을 실시하여 원하는 시료를 분취할 수 있고, Phast system을 이용하여 얻은 시료를 더 분석할 수 있다.

<중 략>

(7) column의 보존 : 컬럼을 장시간 사용하지 않을 경우는 보존중에 컬럼이 노화되기 쉽고, 미생물이 증식하지 않는 용매조성에 치환시켜 놓는다. 컬럼에 첨부되어있는 매뉴얼을 참고로 하고 용매조성을 결정한다. 같은 원리의 컬럼일지라도 회사가 다르면 반드시 매뉴얼을 잘 숙지한 후 조작한다. guard 컬럼을 연결한 분리용 컬럼을 보존 용매에 치환하는 경우는 guard 컬럼과 분리용 컬럼을 일체형의 한개의 컬럼과 같은 조건으로 처리한다.
* 준비물 : 탈기한 Milli-QW 500ml정도, 탈기한 보존용 용매 500ml정도(이러한 시약들은 반드시 사용직전에 조제한다.)
* 과 정 : Milli-QW와 컬럼 보존용 용매의 조제에 30~60분정도 컬럼을 Milli-QW에 바꿔 놓는데 약 60분 정도 시간이 소요되고, 컬럼 보존용의 용매에서 약 60분 정도 시간이 더 소요된다. 용매조에 용액을 Milli-QW로 바꾼 후, 유속을 0.5ml/분 이하로 설정하고 펌프를 작동시킨다. 컬럼펫 용적의 10배 이상의 Milli_QW를 컬럼에 흘려보내고, 이때, 용매유와 펌프사이에 있는 용매의 용적을 고려하여 행한다. 용매유의 용액을 목적의 보존용 용매와 교환한다. 컬럼 펫 용적의 10배 이상 보존용의 용매를 컬럼에 흘려보낸다.
(8) column의 제거 : 장기간 사용하지 않을 때에는 컬럼 중의 용매를 보존용 용매로 교환하고 제거한다. 특히, 유기계 용매나 수계의 염 농도가 높은 용매를 사용하는 경우에는 반드시 용매를 교환하고 제거한다.
* 준비물 : 컬럼 양측의 뚜껑, 탈기한 Milli-QW, 탈기한 컬럼 보존용 용매

참고 자료

없음

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