GPC (Gel Permeation Column)기법을이용한 단백질 분리 및 분자량 측정실험-FPLC

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2013.03.08
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GPC (Gel Permeation Column)기법을이용한 단백질 분리 및 분자량 측정실험-FPLC

목차

1. 실험목적

2. 이론

3. 실험장치 및 시약
3.1 실험장치
3.2 시약

4. 실험과정

5. 실험결과

6. 토의 및 결론

7. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
액체에 용해되어 있는 혼합물의 각각의 분자량의 차이를 이용해서 분리하는 방법 중 대표적인 방법은 다공성 입자를 충진한 column을 이용하는 것이다. 아래 그림과 같이 여러 가지 분자량을 가진 용질이 용해되어 있는 용액을 충진 column의 윗부분에 투입한 후 용질이 함유되어 있지 않은 용매만을 coulmn에 공급하면 분자량이 큰 물질은 충진물질의 공극을 통과하지 않고 입자사이로 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 빠르다. 반면에 분자량이 작은 물질은 입자의 공극을 돌아다니다가 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 오래 걸린다. 이러한 분자량과 column의 통과시간 사이의 관계를 이용하면 시료의 분자량을 측정할 수 있게 된다.

Column을 통과한 단백질용액을 일정한 부피씩 분취기 (Fraction Collector)로 받아내는 동시에 용액의 흡광도를 280nm에서 측정하면 아래그림과 같은 모양이 된다. 이 실험은 IgG (Immunoglobulin G), beta-lactogrobulin, cytidine등 분자량이 서로 다른 단백질 용질을 함유하고 있는 용액을 column을 통과한 후 용액의 흡광도와 통과 부피와의 관계를 나타낸 것이다. 각 용질 단백질들이 분자량이 큰 물질부터 column을 빠져나오는 것을 알 수 있다.

<중 략>

6. 토의 및 결론
FPLC는 Fast protein liquid chromatography의 약자로서 GPC(Gel Permeation Chromatography)의 대표적인 예이다. gas chromatography는 액체를 기화하여 기체로 만든 뒤 뜨겁게 가열하여 사용하기 때문에 분자량 작은 것만 사용할 수 있다. 반면에 liquid chromatography는 column에서 가열이 필요 없다. FPLC에 쓰이는 column을 제조하는 방법은 diameter 10mm, 길이 40mm인 빈 column에 S200 충전물을 채우고 뚜껑을 닫고 Ethanol 20%용액을 흘려주기 위해 pump를 가동한다. Ethanol 20%용액을 계속 흘려주면서 압축시키면 column이 충진 된다. 들어간 S200의 양은 150ml인데 메탄올 용액에서는 200ml로 존재하므로 희석률은 150/200=1.333이다.

참고 자료

실험생물학/박원학 외 6명/형설출판사/2000,8,15/43,44
Stryer 생화학/Lubert Stryer/광일문화사/1999,2,20/47~52
http://en.wikipedia.org/wiki/Fast_protein_liquid_chromatography

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