[분리정제]FPLC-결과레포트

최초 등록일
2011.11.07
최종 저작일
2011.10
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소개글

PLC(Fast Protein Liquid Chromatography)는 단백질, 핵산, 당질등의 고분자 물질의 분리를 목적으로 개발된 전자동식 분리장치이다. 단백질을 분리하고 정제하는 세가지 주요한 접근법은 전기이동, 초원심분리, 크로마토그래피들이다. 단백질을 정제하기만 하면 아미노산의 결합순서를 수월하게 결정할 수 있는 특정한 조각들을 얻는 것이다. 펩티드의 결합순서를 결정하는 자동화된 방법과 DNA 재조합의 방법을 응용할 수 있게 됨으로써 아미노산 결합순서에 관한 풍부한 정보를 얻게 되었으며, 이는 새로운 전망을 열어주고 있다.

목차

1. 실험목적

2. 이론

3. 실험방법

5. 토의 및 결론

6. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
액체에 용해되어 있는 혼합물의 각각의 분자량의 차이를 이용해서 분리하는 방법 중 대표적인 방법은 다공성 입자를 충진한 column을 이용하는 것이다. 아래 그림과 같이 여러 가지 분자량을 가진 용질이 용해되어 있는 용액을 충진 column의 윗부분에 투입한 후 용질이 함유되어 있지 않은 용매만을 coulmn에 공급하면 분자량이 큰 물질은 충진물질의 공극을 통과하지 않고 입자사이로 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 빠르다. 반면에 분자량이 작은 물질은 입자의 공극을 돌아다니다가 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 오래 걸린다. 이러한 분자량과 column의 통과시간 사이의 관계를 이용하면 시료의 분자량을 측정할 수 있게 된다.

Column을 통과한 단백질용액을 일정한 부피씩 분취기 (Fraction Collector)로 받아내는 동시에 용액의 흡광도를 280nm에서 측정하면 아래그림과 같은 모양이 된다. 이 실험은 BSA (Bovine Serum Albumin), IgG (Immunoglobulin G), cytochrome C, beta-lactogrobulin, cytidine등 분자량이 서로 다른 단백질 용질을 함유하고 있는 용액을 column을 통과한 후 용액의 흡광도와 통과 부피와의 관계를 나타낸 것이다. 각 용질 단백질들이 분자량이 큰 물질부터 column을 빠져나오는 것을 알 수 있다.
2. 이론
FPLC(Fast Protein Liquid Chromatography)는 단백질, 핵산, 당질등의 고분자 물질의 분리를 목적으로 개발된 전자동식 분리장치이다. 단백질을 분리하고 정제하는 세가지 주요한 접근법은 전기이동, 초원심분리, 크로마토그래피들이다. 단백질을 정제하기만 하면 아미노산의 결합순서를 수월하게 결정할 수 있는 특정한 조각들을 얻는 것이다. 펩티드의 결합순서를 결정하는 자동화된 방법과 DNA 재조합의 방법을 응용할 수 있게 됨으로써 아미노산 결합순서에 관한 풍부한 정보를 얻게 되었으며, 이는 새로운 전망을 열어주고 있다.
FPLC 분리방법
겔 전기이동법 - 단백질들은 겔 전기이동법으로 분리할수 있으며, 분리된 단백질들은 적당한 방법을 써서 시각적으로 보이게 할 수 있다. 알짜 전하를 가진 분자는 전기장에서 이동할 것이다. 전기이동(electrophoresis)이라고 하는 이 현상은 단밸질 뿐 아니라 DNA와 RAN같은 고분자들을 분리하는 강력한 수단이다. 전기장에서의 단백질(또는 어떤 분자든지)의 이동속조(v)는 전기장의 세기(E), 단백질의 알짜 전하(z) 그리고 마찰계수들로 정해진다.

참고 자료

Stryer 생화학/Lubert Stryer/광일문화사/1999,2,20/47~52
실험생물학/박원학 외 6명/형설출판사/2000,8,15/43,44

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