[생화학실험]GPC 기법을 이용한 단백질 분리 및 미지시료의 분자량 측정

최초 등록일
2017.02.08
최종 저작일
2017.02
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GPC 기법을 이용한 단백질 분리 및 미지시료의 분자량 측정에 대한 실험레포트입니다.
예비 레포트입니다. 결과는 없습니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과

본문내용

1. 실험 목적
가. 실험 목표
액체에 용해되어 있는 혼합물의 각각의 분자량의 차이를 이용해서 분리하는 방법 중 대표적인 방법은 다공성 입자를 충진한 column을 이용하는 것이다. 아래 그림과 같이 여러 가지 분자량을 가진 용질이 용해되어 있는 용액을 충진 column의 윗부분에 투입한 후 용질이 함유되어 있지 않은 용매만을 coulmn에 공급하면 분자량이 큰 물질은 충진물질의 공극을 통과하지 않고 입자사이로 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 빠르다. 반면에 분자량이 작은 물질은 입자의 공극을 돌아다니다가 빠져나오게 되므로 column을 통과하는 시간이 오래 걸린다. 이러한 분자량과 column의 통과시간 사이의 관계를 이용하면 시료의 분자량을 측정할 수 있게된다.
Column을 통과한 단백질용액을 일정한 부피씩 분취기 (Fraction Collector)로 받아내는 동시에 용액의 흡광도를 280㎚에서 측정하면 아래그림과 같은 모양이 된다. 이 실험은 BSA (Bovine Serum Albumin), IgG (I㎜unoglobulin G), cytochrome C, beta-lactogrobulin, cytidine등 분자량이 서로 다른 단백질 용질을 함유하고 있는 용액을 column을 통과한 후 용액의 흡광도와 통과 부피와의 관계를 나타낸 것이다. 각 용질 단백질들이 분자량이 큰 물질부터 column을 빠져아오는 것을 알 수 있다.

2. 실험 이론 및 원리
가. 크로마토그래피(chromatography)역사
생물 조직에 관한 화학적 연구(그리스어의 "bios"는 생명을 뜻하므로 이 화학을 생화학 "biochemistry"라고 한다)에서 곤란한 점 중의 하나는 그들 조직이 방대한 수의 혼합 화합물들에 의해서 조성되어 있고 이들 화합물들은 서로가 너무나 비슷해서 따로 분리한다는 것이 거의 불가능 하다는 점에 있다. 예컨데 대단히 비슷한 색상의 화합물들이 식물의 잎에 다수 함유되어 있다.

참고 자료

없음

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