FPLC-GPC(Gel Permeation Chromatogrphy)를 이용하여 단백질(고분자)분리

최초 등록일
2007.01.03
최종 저작일
2006.12
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소개글

FPLC중 GPC를 이용하여 여러가지 단백질(고분자)을 분리하는 실험에 관한 방법과 GPC의 원리까지 체계적으로 정리되어있다.

목차

1. 목적

2. 이론

본문내용

<GPC 원리>
ㆍ고분자가 컬럼을 통과하는 동안 hydrodynamic volume에 따라 흐름경로의 차가 생기게 된다. 크기가 작은 분자는 큰 분자에 비해 긴 경로를 타고 오며 크기가 큰 분자는 짧은

GPC (gel permeation chromatography)는 어떤 긴 컬럼안에 가교된 고분자 (gel)로 충진 시키고, 이 컬럼안으로 고분자용액을 투과 (permeation)시켜 컬럼안에서 고분자가 크기에 따라 분리될 수 있도록 고안된 분리법이다. 쉽게 말하면, 분자량이 큰 물질이 먼저 유출되고, 작은 분자량물질이 느리게 나오도록 하여, 고분자가 컬럼내부에서 얼마나 머무는가 하는 시간 (retention time)을 측정하여 고분자의 분자량을 산출할 수 있도록 한 것이다. 고분자의 크기별로 분리한다고 해서 SEC (size exclusion chromatography)

1) GPC 컬럼
GPC로 시료를 분석 하려면 먼저 그 시료에 알맞은 용매와 적당한 범위의 pore size를 가지고 있는 컬럼을 선택하여야 한다. GPC용 컬럼은 충진재 재질, 분리 가능한 분자량 범위 즉 pore의 크기, 충진재 입자크기 및 충진 용매에 따라 다양하다.
칼럼 충진제로 쓰이는 물질은 크게 유기재료와 무기재료로 구분되는데 유기재료에는

4) GPC 용매
용매는 주로 tetrahydrofuran (THF)이 가장 많이 사용되고 있고, chloroform, toluene, DMF, DMAc, NMP, HFIP, m-cresol, trichlorobenzene, water, HFIP 등을 사용한다. 용매는 HPLC grade를 사용하여야 하며, 실험실에서 별도의 여과장치와 여과막

참고 자료

http://www.laball.co.kr/data.htm
http://www.polysislab.com/uploads/GPC%20cleanup.pdf
http://www.polysislab.com/uploads/How%20gpc%20works.pdf
기기분석의 원리 강의노트(진인주 교수님)

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