BCA 정량법을 이용한 미지 시료의 단백질 정량의 실험 방법 이론 및 고찰

목차

1. 실험 제목 및 목적
2. 실험 원리,이론
3. 실험 재료
4. 실험 방법
5. 실험 결과 (graph포함)
6. 논의 및 결론 고찰

본문내용

1. 실험 제목 : 단백질 정량 - BCA를 이용한 단백질 정량법-
* 실험 목적 : 미지시료 단백질의 농도 측정,
단백질 정량을 위한 농도 계산 이해와 표준곡선의 작성

2. 실험 원리
* 실험 이론
정량분석 : 어떤 물질이 시료에 어느 정도 포함되어 있는가를 검사하는 것. 정성분석에서‘무엇’이 있는가를 알게 되면, 그에 따른 화학반응 등을 이용하여 함유량을 측정한다
(물질을 구성하는 양적 관계를 명확하게 하는 분석법의 총칭)
흡수분광법 : 단백질을 이루고 있는 아미노산중 대부분의 단백질이 함유하고 고리를 가진 방향족 아미노산 (ex) 페닐알라닌, 타이로신 등)은 280nm 파장에서 빛에너지를 강하게 흡수하는 특징을 가진다. 이중결합 구조가 있는 단백질 화합물의 단백질 용액을 분광 광도계에 넣어 흡수량과 단백질 농도의 상관 관계를 이용하여, 흡수량을 보고 농도를 알 수 있다. 예외가 있기는 하지만 순수한 단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm 일 때 280nm에서의 흡광도는 1.0이다. 따라서 대부분의 순수한 단백질의 농도는 280nm 에서의 흡광도를 측장함으로써 신속히 결정할 수 있다. 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 완전히 회수하여 재 이용할 수 있는 이점이 있다.
염료(dye) 결합 後분광 : 단백질 용액에 dye를 결합하는 반응을 시키면 염료는 색이 바뀌는데 이때 반응물의 최대흡광도를 이용하여 분광광도법으로 단백질의 흡수량을 통해 정량 측정이 가능하다.
구리 환원 법 (Cuㅡ>Cu 2가이온 reduction)
단백질용액을 구리황산용액에 넣어 알칼리조건에서 반응시키면 착화합물을 형성하며 구리 2가이온이 환원된다. 이때 구리용액에 BCA 용액을 첨가 시키면 다시 착화합물을 형성하며 최대 흡광 파장이 562nm인 BCA-Cu가 생기는데 분광광도계에서 흡광도를 측정하여 562nm에서의 흡수량과 단백질과의 정량적 관계로 단백질 양을 알 수 있다.

참고자료

· 생화학 실험서 - 아카데미 서적 저자 주희완/ 2004년 2월 23일 발행 -
· 최신분석화학 -제 4판- 자유아카데미 저자: 김광진 외 3명 2009.2.28작
· 표준 식품 분석학 이론 및 실험 -지구 문화사- 저자 : 채수규 1997.
· 생물공학실험서 한국생물공학회편 -自由아카데미,