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비색 정량법-BCA 시약을 이용한 단백질의 함량 분석

*혜*
최초 등록일
2014.03.05
최종 저작일
2011.03
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목차

1. 서론
1) BCA : bicinchoninic acid

2. 실험과정
1) 검량선 실험
2) 미지의 시료들에 대한 분석 실험

3. 결과
1) 표준 검량선 결과
2) 미지의 시료, 타액 결과
3) 단백지 함량 계산

본문내용

서론
BCA : bicinchoninic acid
단백질이 구리 이온을 환원시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서, 보라빛의 화합물을 생성하게 된다. 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, 분광광도계를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성되고, 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수하여 흡수율이 증가하고, 그것에 비례해서 샘플 안에 있는 단백질 양을 가늠한다. Lowry assay의 변형된 최근의 새로운 방법으로써 간단한 실험을 통하여 단백질을 정량할 수 있는 장점이 있다.

<중 략>

② 증류수 180uL에 미지의 시료와 타액을 각각 20uL씩 섞어 희석액을 마련한다.
희석배수 = 20 / (180+20) = 1 / 10 ③ BCA 시약 C 3mL과 증류수와 시료액 150uL를 각각 섞는다.
④ 37도 water bath나 heat block에서 30분간 처리한다.
⑤ 흐르는 수독물에서 빨리 식힌다.
⑥ 바로 분광광도계 562nm에서 증류수가 들은 발색액으로 Blank를 잡고, Sample 용액들의 흡광도를 측정한다.

참고 자료

없음
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