학과수석/학점 4.5/보고서 만점- 단백질 정량법 비교(BCA, Bradford) 예비 및 결과 보고서

최초 등록일
2020.04.01
최종 저작일
2019.05
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학과 수석, 1년간 전과목 A+, 실험강좌 수석, 보고서 만점인 작성자의 보고서입니다.

소혈청알부민(BSA) 단백질의 농도를 결정하기위해 BCA와 Bradford Assay를 통해 정량하는 실험입니다.

목차

1. 단백질 정량법 비교(BCA, Bradford) 예비
Ⅰ. 실험 목적
Ⅱ. 이론 및 원리
Ⅲ. 실험 기구 및 시약
Ⅳ. 실험 방법
Ⅴ. 주의사항

2. 단백질 정량법 비교 (BCA, Bradford) 결과
Ⅰ. 실험 결과 (Result)
Ⅱ. 고찰

본문내용

Ⅰ. 실험 목적
Bicinchoninic Acid(BCA)와 Bradford를 이용한 단백질 정량법을 이용하여 미지 시료의 단백질 농도를 측정하고 두 방법의 결과를 비교 분석한다. 또한 미지시료를 분석함에 있어 어떤 방식이 적절한 지 판단한다.

Ⅱ. 이론 및 원리
▶ BCA Assay (bichinchominic acid assay)
1) 원리
단백질이 구리 이온(Cu2+)을 1가 양이온(Cu1+)으로 환원시킬 수 있는 성질을 이용한다. 환원(reduction)된 구리 이온은 Bicinchoninic Acid(BCA) 분자 2개와 반응하여 보랏빛의 착물을 형성하게 된다. 이 화합물은 파장 562nm인 빛 흡수율이 반응 전 BCA나 구리 이온이 담긴 용액에 비해서 높기 때문에 spectrophotometer를 사용해서 흡광도 차이를 측정할 수 있다. 보랏빛 착물이 더 많이 생성되면서 흡광도 값이 커지기 때문에 흡광도 값과 단백질의 양은 비례한다.

<중 략>

Ⅱ. 고찰
▶ 실험 오차의 원인
첫째, SDS가 오염된 것으로 판명되었다. 최초 2% SDS 희석 용액을 만들었을 때 용액의 색이 뿌옇고 색깔이 진해 2번의 희석 용액을 만들었지만 모두 같은 용액이 만들어짐을 확인하였고, 실험을 진행하였다. Beer의 법칙에 의해 BSA의 농도와 흡광도가 비례해야하지만 그렇지 않은 결과가 나타났고 원인을 찾기 위해 다양한 시도를 하였다.
①피펫팅 과정에서 시료가 섞일 경우 ②피펫팅이 잘못되었을 경우 ③1회용 큐벳이 오염되었을 경우 ④미지 시료가 오염되었을 경우 ⑤BSA 시료가 오염되었을 경우 ⑥SDS가 오염되었을 경우로 판단을 하였고 각각을 입증하기 위해 실험을 진행하였다. ①~⑤번까지는 모두 이론과 일치하지 않는 결과가 나타났다. 그러나 SDS가 오염되었다고 판단하여 Bradford 실험에서 2% SDS 용액 대신 증류수를 사용하여 희석한 결과 이론과 일치하는 결과를 얻을 수 있었다.

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