단백질 농도 결정 - BCA assay

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최초 등록일
2005.03.31
최종 저작일
2005.03
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목차

Ⅰ. Subject : Protein concentration determination
- Using BCA(bicinchoninic acid) assay
Ⅱ. Introduction
Ⅲ.Material & Method
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference

본문내용

Ⅰ. Subject : Protein concentration determination
- Using BCA(bicinchoninic acid) assay

Ⅱ. Introduction
(ⅰ) 정량분석
물질을 구성하는 양적 관계를 명확하게 하는 분석법의 총칭.
일반적으로 정성분석(定性分析)에 의해 물질을 구성하고 있는 성분을 알고 난 다음 정량분석이 행해진다. 분석방법에 의해 분류하면 물리화학적인 기계 ·기구를 사용해서 수행하는 기기분석과 화학반응을 이용해서 성분의 양을 결정하는 화학분석으로 크게 나누어진다. 기기분석은 조작이 간단해서 정밀도가 높고, 개인차가 적다. 이것에는 폴라로그래피 ·광흡수(光吸收)분석법 ·질량분석법 ·발광분광(發光分光)분석법 ·기체크로마토그래피와 같은 방법이 사용되고 있다. 화학분석은 조작법에 의해 분류하면 중량분석과 용량분석이 있다. 그리고 시료(試料)의 종류에 따라 분류하면 기체분석 ·미량분석이 있고, 그 방법에 의해 분류하면 비색(比色)분석, 비탁(比濁)분석 및 전기분해분석 등이 있다.

(ⅱ) Ninhydrin 시험
α-아미노산, 펩티드 및 단백질은 pH 4~8에서 그리고 100℃ 근처에서 닌히드린과 반응하여 자주색 또는 붉은 자주색의 착화합물을 만든다. 이 착색물질의 색깔은 아미노산에 따라 다르며 아미노산인 프롤린과 하이드록시 프롤린의 경우에는 황색이다. 일차아민과 NH3도 양성반응을 나타내지만 이때는 CO2가 유리되지 않는다. 그러나 β-아미노산과 γ-아미노산 등은 정색하지 않는다. 이 닌히드린 실험은 매우 예민하기 때문에 아미노산 및 단백질의 확인에 보편적으로 쓰일 뿐 아니라 아미노산의 정량에도 이용된다.

 Ninhydrin :
-2,2-dihydroxy-1, 3-indandione
-화학식 C9H6O4. 무색의 주상결정으로 녹는점 250℃(분해)
-프탈산에스테르와 아세트산에스테르의 결합에 의해 얻어진 디케토히드로인덴카르복시 산에스테르를 가수분해와 동시에 탈탄산하여 얻을 수 있다.
-아미노산과 반응하여 특징 있는 청자색을 나타내므로 아미노산의 발색시약으로 쓰인다. 반응은 아미노기를 가지는 유기물 검출에 흔히 사용된다. 닌히드린은 아미노산을 산화시 켜 암모니아와 이산화탄소를 유리시키고 알데하이드를 생성하여 자신은 환원된다. 유리 된 암모니아는 환원닌히드린 및 잔존하는 닌히드린과 반응하여 아미노산에 이 반응은 아 미노기를 가지는 단백질, 펩티드, 아미노산에 대해 양성을 나타내며, 암모니아에 대해서 도 양성반응을 나타낸다. BSA 시료와는 남색, 글리신과는 짙은 남색, 탈지분유와는 연보라 발색을 한다.

참고 자료

(ⅰ) David L. Nelson Micheal M.Cox, 2000,
Lehinger Principles of Biochemistry, third edition, 121p, worth publishers,
New York
(ⅱ) David Harvey, 2001, 현대분석화학, 368~393p, McGraw-Hill, Korea
(ⅲ) http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/protein/bca.html
(BRIC이 저장하고 있는 웹 문서)
(ⅳ) http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/spec/beerslaw.htm
(aboutlambert-beer's law)
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