[일반생물학실험]단백질 정량 분석

최초 등록일
2020.01.31
최종 저작일
2020.01
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"[일반생물학실험]단백질 정량 분석"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 이론 및 원리
가. 실험 요약
나. 단백질 정량
다. 단백질 정량법의 종류

2. 실험 방법
가. 검량선 도출 및 최적 파장대 설정
나. 단백질 농도 측정

3. 토의 사항
가. 실험 고찰

4. 토의 사항
가. 실험 고찰

본문내용

1. 실험 이론 및 원리
가. 실험 요약
본 실험은 여러 가지 단백질 정량 분석 방법 중에 Lowry법을 이용해서 농도를 알고 있는 단백질 시료들을 반응시킨 후에 Uv/Vis spectrophotometer를 이용해서 흡광도를 측정해 최적의 파장대에서 BSA Standard Curve를 작성하고, 미지 농도의 단백질 시료를 BSA Standard Curve를 이용해 농도를 알아보는 실험이었다. 단백질 정량은 생화학, 생물학 분야에서 기초적인 과정이고, 이 분야에서는 중간에 실험에서 잘못이 있더라도 결과가 나올 때까지 알 수 없는 경우가 많아 기초 단계인 단백질 정량을 잘 아는 것은 매우 중요하기 때문에 본 실험을 배우고 진행하게 되었다.

나. 단백질 정량
단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 보통 peptide나 단백질을 6N HCl 용액이 들어있는 시험관에서 공기를 제거하고 밀봉한 후 100°에서 8-24시간 동안 가열하여 가수분해 시킨다. 이러한 가열조건에서는 모든 peptide bond가 파괴되고 glutamine과 asparagine의 경우에는 side chain의 amide bond도 파괴되게 된다. 또한 tryptophan과 serine, threonine 등의 아미노산은 파괴되기 때문에 이러한 단백질을 정량하기 위해서는 특별히 주의를 기울여야 한다. 산성 용액에서 파괴되는 아미노산을 분석하기 위해서는 별도로 단백질을 alkaline-hydrolysis시킨 후 분석한 후에 보정해야 한다. 즉, 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질의 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신독도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다.

다. 단백질 정량법의 종류
1) 분광학적 방법
엄밀하게 말하자면 분광학적 방법은 Colorimetric 방법은 아니다.

참고 자료

식품의약품안전처 단백질정량(로리)법 매뉴얼
일반생물학실험서, 민철기, 라이프사이언스, 1999, p.43~47
화학대사전, 세화 편집부, 세화, 4권 2001, p.84, 183, 9권 p.906~907

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