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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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생명과학실험1 Immunoprecipitation (IP)2025.01.171. Immunoprecipitation (면역침강법, IP) 면역침강법은 항원-항체 반응을 이용하여 원하는 단백질을 분리하고자 하는 실험이다. 단백질은 특정한 항체에만 결합하는 항체 특이성을 가지고 있으므로, 검출하고자 하는 target protein도 특정한 종류의 항체와만 결합하게 된다. 항원-항체 복합체가 바닥에 가라앉도록 하기 위해서 먼저 항체와 Bead를 붙이고, bead와 결합한 항체가 다시 단백질과 결합하여 단백질-항체-Bead 복합체를 형성하게 된다. 이 복합체가 원심분리를 통해 침강하게 되면서 원하는 단백질을 분리...2025.01.17
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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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생화학 크로마토그래피 발표A+ 받은 자료2025.05.071. 크로마토그래피 크로마토그래피란 정지상과 이동상을 사용해 시료들이 섞여 있는 혼합액을 이동속도 차이를 이용하여 분리하는 방법입니다. 크로마토그래피는 이동상과 고정상에 따라 기체-고체, 기체-액체, 액체-액체, 액체-고체 등으로 분류할 수 있습니다. 기체크로마토그래피는 기화가 가능한 시료를 사용하고 액체크로마토그래피는 용해성이 있는 시료를 사용합니다. 크로마토그래피의 특징은 여러 가지 용매로 실험을 해볼 수 있고 정확한 분리가 가능하며, 간단하고 빠르게 수행할 수 있다는 장점이 있습니다. 2. 기체크로마토그래피 기체크로마토그래피는...2025.05.07
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효소학_경북대_족보_기말고사2025.05.031. 보조효소 보조효소에는 Ubiquinone, flavin, pyrimidine nucleotide, lipoic acid, glutathione, coenzyme A, porphyrin, SAM 등 10개가 있다. 이들 보조효소는 효소 단백질에 결합하여 효소의 활성이나 안정성에 필요한 구조를 유지하는 역할을 한다. 2. 금속이온의 역할 금속이온은 효소 단백질에 결합하여 활성이나 안정성에 필요한 구조를 유지하고, 기질과 결합하여 기질-금속 복합체를 형성하여 기질로 작용하게 하는 등 4가지 역할을 한다. 3. 분광학적 방법 분광학적...2025.05.03