[약학]PCR

소개

Polymerase chain reaction
에대한 내용입니다

양은 작지만
그림도 많이 넣고
자세히 조사했으므로
도움 많이 되실겁니다

목차

1. PCR 원리
2. PCR 과정
3. PCR 응용
4. 실제 PCR 장비

본문내용

1. PCR 원리
1) Polymerase Chain Reaction은 유전자 진단법 중 하나로, DNA 중합효소에 의한 DNA 복제 특징을 이용한다. DNA의 양쪽 가닥을 주형으로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로, 전체 DNA로부터 특정 DNA 영역을 시험관 내에서 효소에 의해 선택적으로 증폭시킨다.
2) DNA 중합효소인 Taq polymerase 는 고온의 온천수(73~74℃)에서 서식하는 미생물에서 분리한 것으로, 72℃에서 활성이 가장 높으며 95℃이상의 고온에서도 매우 안정하여 PCR을 자동화 시키는데 결정적인 역할을 하였다.
3) PCR은 DNA 복제의 복잡한 단계를 불과 수 시간의 효소 반응으로서 구현해 낼 수 있으며 그 응용성이 매우 높은 DNA 진단의 중심이 되는 기법이다. 최근에는 분자생물학적인 접근을 필요로 하는 모든 생명과학 분야에서 필수적인 기술이 되었다.
2. PCR 과정
Step 1 > Denaturation [ 변성 ]
- primer, dNTP, 내열성 DNA polymerase를 함유하는
반응액 중에 목적으로 하는 두 가닥 DNA 단편을
열변성한다. ( 94℃, 30sec )
- 90~96℃로 가열하여 double strand DNA(dsDNA)를
single strand DNA(ssDNA)로 분리시킨다. 높은 온도일수록
ssDNA로 잘 이행되지만 Taq DNA polymeras가 아주 높은
온도에서는 활성이 낮아질 수 있으므로 보통 94℃로 한다.
- 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킨다.
- Tm = [4*(G+C)] + [2*(A+T)] ℃

참고자료

· 없음