[생화학]BCA 단백질 정량

소개

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목차

1.subject
2.introdution
3.Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6.6. Reference

본문내용

1.Subject
BCA(bicinchoninic acid)단백질 정량법

2. Introduction
1) Bicinchoninic Acid(BCA)를 이용한 단백질 정량법의 원리를 이해한다.
2) Spectrophotometer를 통하여 미지시료 U1, U2의 흡광도를 측정한 후, Standard
Curve를 통하여 미지시료 U1, U2의 농도를 구한다.

BCA 정량법

Bicinchoninic Acid Assay. Pierce방식이라고도 함.
샘플내에 있는 단백질 양을 측정하고자 할 때 쓰이는 것으로서, 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서, 보라빛의 화합물을 생성하게 된다. 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성되었을테고, 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수하니까 흡수율이 증가하고, 그것에 비례해서 샘플 안에 있는 단백질 양을 가늠한다. Lowry assay의 변형된 최근의 새로운 방법으로써 간단한 실험을 통하여 단백질을 정량할 수 있는 장점이 있다.

BCA정량법의 장단점
-BCA정량법의 장점
1. 일반적인 버퍼물질에 간섭을 덜 받는다
2. 높은 온도에서 한다면 아주 민감하고 빠른 반응을 할수 있다
3. 계면활성제와 같이 사용할 수 있다.
4. 반응시약이 안정적이다.
5. 서로다른 단백질 사이에 반응의 차이가 거의 없다
6.Lowry assay를 사용했을 때보다 방해를 주는 물질이 없다.

-BCA정량법의 단점
1. 실온에서 반응이 완전히 수행되지 않는다. 이것은 다량의 단백질을 정량 할 때 문제가 될 수 있다.
2. 농축된 단백질 샘플은 희석이 종종 필요하다.
3.단백질의 성질이 바뀐다.

참고자료

· http://blog.naver.com/ddelmonte?Redirect=Log&logNo=120024163876
· http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=dT/D3oAT+vQN1F32wQks7w8h+Pdp2+2K&qb=YmNhIMGkt64=
· 한국 생화학회(1999), 실험생화학 개정 3판, 탐구당