[생화학실험] 단백질 정량분석 : Lowry assay and Bradford assay

소개글

저희 학교 조교의 주문대로 Discussion에 중점을 두며 열심히 썼습니다. (고찰 - 한 장 분량, 글자 point ; 10)
A+ 받은 보고서이니 참고하시면 도움 되실 겁니다~

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시료 및 기자재
7. 실험방법
8. 실험결과
9. 고찰
10. 참고문헌
11. 숙제

본문내용

✶ 단백질 정량분석
단백질 검출을 통한 단백질의 정량 분석하는 방법에는 대표적으로 Biuret assay (칼슘이온이 펩타이드와 결합하여 색이 변하는 원리를 이용, 감도 1-10mg), Lowry assay (Lowry: 금속성 이온이 고리형구조의 잔기를 가진 아미노산과 결합하는 원리, 감도 20-300 μg), BCA 법(Lowry법을 응용, BCA reagent 사용), Bradford assay (Coomassie Brilliant Blue라는 염색약과 염기성 아미노산(라이신)의 결합으로 색이 변함, 감도 1-100μg), 그리고 UV spectrometry(고리형 구조의 아미노산이 280nm의 파장을 가지는 빛을 흡수하는 원리를 이용)이 있다. 단백질을 정량분석하기 위해서는 우선 가수 분해시켜야 한다. 단백질을 가수분해하면 Peptide Bond가 끊어져 Amino Acid로 나뉘는데, 단백질은 보통 6N HCl용액에 단백질을 넣고 공기를 제거하고 밀봉하여 100C에서 8시간~24시간 동안 가열하여 가수분해 시킨다. 이런 가열조건에서는 모든 Peptide Bond가 파괴되며 Amino Acid 중 Glutamine과 Asparagine은 Side Chain의 Amino Bond까지 파괴된다.Tryptophan, Serine, 그리고 Threonine 등의 Amino Acid는 쉽게 파괴될 수 있으므로, 이러한 아미노산을 포함한 단백질의 경우 특별한 주의를 필요로 한다. Acid Solution에서 파괴된 Amino Acid를 분석하기 위해서는 단백질을Alkaline Hydrolysis 시켜 분석한 후 보정한다. 즉 ,단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 포함된 여러 기타 성분, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 알맞은 Method를 선택해야 한다.

참고 자료

없음