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Agarose gel 전기영동법

*귀*
최초 등록일
2005.05.12
최종 저작일
2005.04
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목차

1.실험일자
2.목절
3.기구및 시약
4.방법
5.결과및 토론

본문내용

1.실험일자 ; 2005. 3. 18
2.실험목적 : Agarose gel 전기영동법의 원리를 이해하고 DNA를 직접 전기영동 시켜본다.
3.실험기구 및 시약 : agarose, 1X TAE , EtBr, comb, 전기영동 장치, UV light box
4.실험방법
① agarose와 1x TAE를 500㎖ 플라스크에 넣은 후 전자렌지에 2-4분간가열하여 agarose를 완전히 녹인다.
② 약 60℃까지 식힌 후 EtBr를 25㎕ 첨가하여 섞어 plated에 부은후 comb를 꼽아 20-30 분간 굳힌다.
③ comb를 제거하고 전기 영동 장치에 1 x TAE를 넣은 후 gel을 넣는다.
④ 시료에 loading buffer를 첨가하여 gel의 well 에 loading한다.
⑤ 전기를 걸어준뒤 30~60분 기다린다
⑥ DNA가 내려오면 UV light box 위에서 확인한다.

5.결과 및 토론
실험결과 DNA가 전기영동에 의하여 끌려 내려온 것을 볼 수 있었다. 같은 조원의 것과 비교해 볼때 같은 양과 같은 모양을 보여 실험이 올바르게 되었다고 생각된다. loading buffer를 피펫을 이용하여 섞어 주는데 이것은 DNA가 움직이는 것을 눈으로 확인 할수 있게 하고 DNA가 가라앉을 수 있도록 하기위하여 넣는 것이다.
전기영동의 원리를 간단히 살펴보면 Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 음전하를 띠므로 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기, 모양에 따라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기, 분리, 양의 확인이 가능하다.

☆이동속도에 영향을 주는 요인들
1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
2) Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
3) DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가

참고 자료

없음

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