Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트

소개

제한효소 처리 후 전기영동으로 확인한 실험에 대한 레포트입니다.
레포트에 시간을 많이 들여 A+ 받았던 과목이기 때문에, 도움이 되실 거라 생각합니다.

목차

1.실험 배경 -----------------------------------------
1-1 Plasmid DNA와 Vector
1-2 Cloning의 기본 원리
1-3 Restriction Enzyme Digestion
1-4 Gel Electrophoresis
1-5 사용되는 Buffer 종류 및 역할
1-6 pBABE EGFR WT와 SalⅠ, NheⅠ
1-7 Dyne LoadingSTAR와 Glycerol의 역할

2. 실험 목적 및 방법 --------------------------------
2-1 실험목적
2-2 실험방법

3. 실험 결과 ----------------------------------------
3-1 실험 결과
3-2 결론 및 고찰

4. 참고 문헌 ----------------------------------------

본문내용

1. 실험 배경
1-1 Plasmid DNA와 Vector
Plasmid DNA란 bacteria cell내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 circular DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 bacteria로부 터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA cloning을 위한 핵심적인 도구이다. Vector 에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, cloning이 이루어진 후 많은 bacteria 중에서 vector를 가지고 있는 bacteria만 분리할 수 있도록 하는 antibiotic resistance gene이 존재해야 한다.

1-2 Cloning의 기본 원리
DNA cloning이란 DNA 특정 부분과 동일한 여러 복제본을 생성하는 것이다. DNA cloning을 위해서는 Plasmid에 cloning을 하려는 유전자 조각을 삽입하여 recombinant DNA를 만든 후, bacterial cell에 주입한다. 이것을 transforamtion이 라고 하며, 이때, recombinant DNA가 bacterial cell wall을 통과하기 쉽도록 화학 적 처리가 이루어진 competent cell을 사용한다. Transformation이 된 bacterial cell이 세포분열을 하여 clone이 생성되고, 각 clone에는 recombinant DNA의 복 제본들이 존재한다.

1-3 Restriction enzyme Digestion
Restriction enzyme digestion이란 restriction enzyme을 이용하여 DNA을 자르는 것을 말한다. Restriction enzyme은 DNA 분자를 인식하고, 특정한 DNA 서열에서 잘라내는 역할을 한다. Restriction enzyme으로 잘라진 DNA 조각은 일렬로 잘라 진 blunt-end나 상보적인 끝을 가진 sticky-end를 생성한다. Blunt-end는 DNA 조 각을 연결할 때 서로 정확히 일치해야 하므로 조작이 더 어렵지만, Sticky-end는 상보적인 끝을 가지고 있어 연결이 쉽기 때문에 cloning을 할 때 더 용이하다. Restriction enzyme이 1μg의 DNA를 37ºC에서 1시간동안 100%로 자를 수 있는 활성을 가질 때, 이를 "1 unit"의 activity를 가진다고 할 수 있다.

참고자료

· Campbell Essential Biology
· Essential Genetics and Genomics
· Restriction Digest Analysis, https://youtu.be/3esTzddSgX8?feature=shared
· What is Gel Electrophoresis?, https://youtu.be/GUXKQBknYQo?feature=shared