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PlasmidDNA Purification & Sanger Sequencing 보고서2025.01.211. Bacterial transformation 박테리아 transformation은 특정 DNA 조각을 박테리아의 유전체 내로 삽입하여 새로운 유전형질이 발현되도록 하는 방법입니다. 박테리아 plasmid는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site와 항생제 내성 유전자를 가지고 있어 외부 유전 물질을 자유롭게 삽입할 수 있습니다. 이를 통해 약 8kb의 긴 DNA 조각을 박테리아 plasmid에 삽입하여 복제할 수 있습니다. 2. Liquid LB culture 및 Colony inoculat...2025.01.21
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DNA Ligation & Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. DNA Ligation & Transformation 제한효소를 처리하여 얻어낸 insert DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 vector에 삽입한다. DNA strand의 5'에 존재하는 인산기와 3'에 존재하는 OH기 사이에 phosphodiester bond를 형성하여 ligation하고, ligation product를 competent cell에 형질전환한 다음 plate에 ampicillin resistance에 의해 생성된 colony를 selection한다. 2. Mini-scale preparatio...2025.01.18
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인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 5. Restriction Enzyme Cutting2025.01.041. Restriction Enzyme Cutting 이번 실험은 지난 실험에서 E.coli 배양액에서 Alkaimen Lysis mothod으로 추출한 plasmid DNA를 restriction enzyme을 사용하여 절단하였다. 그리고 gel electrophoresis를 통해, 절단된 plasma DNA를 확인하는 것을 목표로 하였다. 실험 결과, 5,000~6,000 bp의 band와 700~1,000 bp의 bnad로 2개의 주요한 DNA band를 관찰할 수 있었다. 추가로, gel 아랫부분에 몇 개의 DNA band가...2025.01.04
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Plasmid DNA 분리 결과 레포트2025.04.261. Plasmid DNA 분리 이 실험에서는 박테리아에서 Plasmid DNA를 분리하는 과정을 수행했습니다. 박테리아 배양액에서 박테리아를 추출하고, mini prep 방법을 통해 세포벽과 세포막을 부수어 Plasmid DNA만 분리했습니다. 그 후 1% Agarose Gel에 Sample Loading하고 전기영동을 통해 DNA 밴드를 확인했습니다. 하지만 실험 결과 DNA가 추출되지 않아 DNA Ladder와 비교할 수 없었습니다. 이는 실험 과정에서 약간의 차이로 인해 오차가 발생했거나 실험 진행이 미숙했기 때문으로 분석됩...2025.04.26
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제한효소와 아가로즈젤 전기영동/ Restriction Digest and Agarose Gel Electrophoresis2025.01.121. Plasmid DNA Plasmid DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 vector를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 cell에는 plasmid DNA와 대장균 cell의 염색체 DNA인 chromosomal DNA가 독자적으로 존재하기 때문에 plasmid DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 일반적으로 Restriction enzymes를 처리하지 않은 plasmid DNA의 경우 ope...2025.01.12
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Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트2025.01.211. Plasmid DNA와 Vector Plasmid DNA는 박테리아 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 원형 DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 박테리아로부터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA 클로닝을 위한 핵심적인 도구이다. Vector에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, 클로닝이 이루어진 후 많은 박테리아 중에서 vector를 가지고 있는 박테리아만 분리할 수 있도록 하는...2025.01.21
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DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA2025.01.221. DNA ligation DNA ligation은 T4 DNA ligase 효소를 이용하여 DNA 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 과정이다. 이 과정에서 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 self-ligation 등 세 가지 형태가 나타날 수 있다. 본 실험에서는 HindⅢ와 NdeⅠ로 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase로 ligation하였다. 2. Transformation ligation...2025.01.22
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Plasmid DNA miniprep2025.05.141. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacteria에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적으로 복제 가능한 복제기점을 갖고 있다. Plasmid DNA는 genomic DNA와 달리 생존에 필수적이지 않은 정보를 포함하고 있으며, 이를 이용하여 유전자 발현 여부를 조사할 수 있다. Plasmid DNA는 supercoiled DNA 형태를 가지고 있어 유전자 분리, 조작, cloning 등 유전공학에 활용되기 쉽다. 2. Plasmid DNA extraction Plasmid DNA를 활용하기 위해...2025.05.14
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Purification of Plasmid DNA by Mini-prep2025.01.211. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. Plasmid DNA는 host cell 당 적게는 1~3개, 많게는 수십 개까지 복제되기도 한다. Plasmid DNA 또한 유전자를 지녔기에 transformation을 일으킬 수 있으며, vector로서 사용되기도 한다. 2. Plasmid DNA Purification Mini-prep은 bacteria로부터 plasmid DNA만을 정제하는 실험법이다. 수확한 bacteria에 다...2025.01.21
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대장균 배양, 형질전환, Plasmid DNA 분리, DNA 전기영동 실험 보고서2025.01.121. 대장균(E.coli) 대장균(E.coli)은 그람음성 간균으로, 포자를 생성하지 않으며 1-2 microns x 30-30 micron 크기의 박테리아입니다. 섭씨 37도에서 잘 자라며, 정상적인 인간의 장에 존재하여 건강에 유익합니다. 하지만 배설물과 함께 나와 질병을 일으킬 수 있습니다. 2. 배지 배지는 미생물이나 세포를 성장시키는데 사용됩니다. 가장 일반적인 배지는 액체 영양배지나 LB배지이며, 이를 Agar와 섞어 고체배지로 사용할 수 있습니다. 이번 실험에서 사용한 LB배지는 tryptone, yeast extrac...2025.01.12
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