총 16개
-
A+ 생화학실험 <10주차. Cloning> 레포트2025.01.201. Molecular Cloning Molecular cloning은 분자 생물학에서 recombinant DNA를 생성하고 숙주 내에서 replication을 수행하는 실험적인 기법입니다. 이 기법의 주된 목적은 target 유전자(insert)를 plasmid DNA(vector)에 넣어 대량의 target 유전자 또는 해당 유전자로 인해 발현되는 단백질을 얻는 것입니다. 일반적으로, 서로 다른 유기체에서 얻은 DNA sequence를 사용하며, 하나의 유기체는 cloning되는 DNA의 source 역할을 하며, 다른 유기체...2025.01.20
-
제한효소를 이용한 DNA절단 및 전기영동 실험2025.11.131. 제한효소와 DNA절단 제한효소는 특정한 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 효소이다. 실험에서 사용된 EcoR1과 HindⅢ 같은 제한효소들은 각각 다른 염기서열을 인식하여 DNA를 절단한다. 절단된 DNA의 말단 모양에 따라 blunt end(직선으로 잘린 경우)와 sticky end(ㄴ방향에서 ㄱ방향으로 꺾여서 잘린 경우)로 분류된다. 2. Sticky end와 Blunt end의 특성 Sticky end는 핵산 한가닥의 염기들이 노출되어 있어 상보적인 염기와 수소결합할 준비가 되어있다. 반면 blunt end는 직선으로...2025.11.13
-
Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트2025.01.211. Plasmid DNA와 Vector Plasmid DNA는 박테리아 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 원형 DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 박테리아로부터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA 클로닝을 위한 핵심적인 도구이다. Vector에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, 클로닝이 이루어진 후 많은 박테리아 중에서 vector를 가지고 있는 박테리아만 분리할 수 있도록 하는...2025.01.21
-
[A]서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. TA Cloning TA Cloning은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 cloning을 진행하는 기법이다. Lac Z selection을 통해 blue colony와 white colony를 확인하여 insert DNA가 정상적으로 삽입되었는지 확인할 수 있다. Self-ligation을 줄이기 위해 alkaline phosphatase 처리나 T-overhang cloning protocol 수정 등의 방법을 사용할 수 있다....2025.01.18
-
Gel extraction & TA cloning 실험 보고서2025.11.171. Gel Extraction Agarose gel 전기영동으로 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 기술이다. FADF buffer를 이용해 gel을 용해한 후, silica membrane을 가진 column에 DNA를 결합시키고 wash buffer로 불순물을 제거한 후 ddH2O로 elution하는 과정으로 진행된다. Chaotropic salt가 포함된 FADF buffer는 silica membrane의 O-와 DNA의 인산기 사이에 cation bridge를 형성하여 DNA 부착을 가능하게 한...2025.11.17
-
분자생물학 및 유전공학의 실험방법2025.05.101. Restriction endonuclease DNA의 specific short sequences를 인식하고 쪼갤 수 있는 enzyme입니다. Cloning vectors는 host cell에 외래 DNA를 삽입하기 위해 사용할 수 있는 DNA로, selectable markers와 replication origins을 가지고 있습니다. 2. Nucleases Nucleases(핵산가수분해효소)는 phospho diester bond의 ester bond를 Hydrolyze하는 enzyme이며, Phosphatases(인산분해...2025.05.10
-
포토샵 배우기_지우개툴,도장툴2025.05.111. 지우개 툴(Eraser Tool) 지우개 툴은 이미지를 지우는 도구로, 기본 지우개 도구, 배경 지우개 도구, 자동 지우개 도구 등 3가지 종류가 있다. 기본 지우개 툴은 이미지를 원하는 대로 지울 수 있으며, 배경색 지우개 툴은 이미지가 여러 레이어로 구성된 경우 배경을 투명하게 지울 수 있다. 마술 지우개 툴은 선택한 영역만 지워지는 도구로, 이미지 합성 시 부자연스러운 경계선을 연결할 수 있다. 2. 도장 툴(Clone Stamp Tool) 도장 툴은 특정 영역을 복제하여 다른 영역에 적용할 수 있는 도구이다. 클론 스탬...2025.05.11
-
제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 절단 및 겔 전기영동 분석2025.12.161. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 염기서열을 인식하여 이중 가닥 DNA를 절단하는 효소로, 세균의 바이러스 방어기작에서 유래되었다. Type I, II, III로 분류되며, Type II가 실험에 가장 널리 사용된다. 인식 부위와 절단 부위가 일치하고, 평활 말단과 점착 말단을 생성한다. 제한효소 선택 시 인식 서열, 반응 조건, star activity 등을 고려해야 한다. 2. 아가로스 겔 전기영동(Agarose Gel Electrophoresis) 전기장을 이용하여 DNA를 크기별로 분리하는 기...2025.12.16
-
박테리아 형질전환을 이용한 플라스미드 클로닝 실험2025.12.181. 클로닝(Cloning) 클로닝은 유전적으로 동일한 DNA를 복제하는 과정으로, 분자생물학에서는 특정 유전자를 벡터에 삽입하고 증폭시켜 다량으로 복제하는 기술을 의미한다. 클로닝의 주요 목적은 한정된 양의 출발물질로부터 다수의 재조합 DNA 분자를 형성하는 것이다. DNA 절편의 출처는 유전체 라이브러리, mRNA 역전사, PCR 산물, 인공합성 등 다양하다. 세균(대장균)은 빠른 증식으로 인해 클로닝의 모델생물로 널리 사용된다. 2. 형질전환(Transformation) 형질전환은 세포가 외부의 DNA를 세포막을 통해 직접 받...2025.12.18
-
TA cloning과 Transformation을 이용한 DNA 클로닝2025.12.171. 전기영동 (Electrophoresis) DNA는 인산기를 포함하여 음전하를 띠고 전기장에서 양극으로 이동한다. Agarose gel 전기영동은 DNA 크기에 따른 이동속도 차이를 이용하여 DNA를 분리한다. Agarose 농도, DNA 형태, 전압, buffer 종류 등이 이동속도에 영향을 미친다. TAE buffer는 Tris, acetic acid, EDTA로 구성되며 DNA 분해를 방지한다. Loading dye는 glycerol과 염색약으로 구성되어 sample 침강과 시각화를 돕는다. 2. Gel Purificati...2025.12.17
1 / 2
