Plasmid purification & DNA 정량 A+ report

소개

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목차

1. Introduction
2. Methods (mini-prep)
3. Result & Discussion
4. References

본문내용

-Objective
Transformation 과정을 통해 Bacterial cell 안에서 Insert DNA와 Vector가 ligation 된 후, 증식된 plasmid DNA만을 세포에서 추출하기 위해, 그리고 잘 추출하였는지 DNA 농도 및 순도를 보기 위해 Plasmid purification 및 DNA 정량 실험을 진행하고자 한다.

-Principle 및 Theory (Background)
가. Plasmid DNA transformation 이란?
우선, plasmid DNA는 세포 내 핵 이외의 세포질 속에 있으며(세균 유전체와 독립적으로 존재) 자율적으로 증식하고 스스로 복제 가능한 성질을 가진, 자손에게 유전되는 DNA이다. 생장에 필수적이지 않지만 세균에 이점을 제공하는 유전자들이 존재한다. Origin of replication을 가지는 circular한 extrachromosomal DNA로, 접합전달, 항생물질에 대한 저항성, 항(anti)물질의 합성 등의 기능을 가지고 있어 특정 유전자 DNA를 삽입하여 cloning vector로 이용된다. 또한, plasmid DNA에는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자가 위치해서 항생제를 첨가한 배지에서 선택적으로 선별 가능하다는 특징을 가진다.

Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host cell의 유전자로 통합되어 새로운 특성을 나타나게 만든다. 이 과정에서 일반적으로 열 충격(heat shock; 화학적 방법)이나 전기 충격(electroporation)을 이용하여 처리한다. 변형된 세포는 새로운 유전자를 표현하며, 특정 세포기능을 연구하거나 유전자 치료 등의 목적으로 사용될 수 있다.

참고자료

· https://blog.naver.com/snc4you/222972512845
· https://blog.naver.com/snc4you/223014511967
· https://www.intronbio.co.kr:6002/intronbio/product/product_view.php?PRDT_ID=1#none
· Gene Genie | BBC World Service, http://Bbc.co.uk (2000-05-01, Retrieved 2010-08-04)
· George Acquaah, Principles of Plant Genetics and Breeding(2012), John Wiley & Sons Inc.
· T. A. Brown, Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction(6th edition, 2010), Wiley-Blackwell, Chapter 2.
· Arlene Judith Klotzko, The cloning sourcebook(2001), Oxford University Press.
· Wakayama, S., et al. (2013) Successful serial recloning in the mouse over multiple generations. Cell Stem Cell 12, 293–7.
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5145033&cid=61232&categoryId=61232