Colony PCR

소개

"Colony PCR"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험목적

2. 실험이론
1) Colony
2) PCR
3) Ligation
4) 전기영동(gel electrophoresis)

3. 기구 및 시약

4. 실험방법

5. 참고사항
1) T7 promoter primer
2) SP6 promoter primer

본문내용

1. 실험목적
- 형질전환시킨 white colony를 이쑤시개로 따서 T-vector 상의 primer를 사용하여 PCR시킨다.
- PCR Product를 전기 영동하여 원하는 DNA fragment가 있는지 분석한다.
- Colony PCR의 원리를 이해하고 실험법을 익힌다.
- E.coli나 yeast clone이 ligation이 잘 되어 원하는 DNA fragment를 가지고 있는 플라스미드가 삽입된 colony 인지를 확인하는 방법이다.

2. 실험이론
(1) Colony
세균 또는 단세포 조류(藻類)·균류(菌類) 등이 고형배지에서 육안으로 볼 수 있는 집단으로, colony의 형성은 균의 종류나 배지의 조성·배양시간·온도·습도 등 많은 인자에 의하여 영향받는다.
대장균이나 고초균과 같이 증식이 빠른 균을 적당한 배지에서 배양하면 24시간 이내에 육안으로 볼 수 있는 colony를 만드는데 결핵균 등은 1주일 이상이 소요된다. colony의 성상을 크기·모양·빛깔·투명도·굳기 등에 대하여 관찰해 균종을 동정하는 데 참고로 할 수 있다.
세포의 경우, 일정한 배지·조건 아래에서 단일종의 colony의 형태는 종의 특징으로 거론되는 일이 있다. 균의 변이 중에는 colony의 성상의 변화를 수반하는 것이 있다.

*colony를 얻기 위해서는 플레이트에 굳힌 배지 위에 도말하여 균액을 배양시킨다.

(2)PCR
중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)의 약자. DNA합성효소(DNA polymerase)가 DNA합성에 시발체를 필요로 하는데, 이 시발체에서 5′→3′방향으로 DNA가 합성하는 것을 이용하여, ① DNA의 외가닥에의 변성 → ② 시발체의 결합 → ③ 중합효소에 의한 상보성DNA의 합성 → ① 변성 → ② 시발체 결합···이라는 회로를 반복하는 것으로서 목적인 유전자 영역만을 시험관 내에서 증식시킨다.

참고자료

· colony: https://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000890970
· colony pcr1: http://www.incodom.kr/Colony_PCR
· colony pcr2: https://blog.addgene.org/plasmids-101-colony-pcr
· pcr: https://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000824276
· ligation1: https://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000709209
· ligation2: https://www.addgene.org/protocols/dna-ligation/
· Vector: https://www.scienceall.com/dna-%EC%9A%B4%EB%B0%98%EC%B2%B4-dna-vector/
· T-Vector: https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5703186&ref=y&cid=61232&categoryId=61232
· (사진자료) blue-white colony: https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B8%94%EB%A3%A8_%ED%99%94%EC%9D%B4%ED%8A%B8_%EC%8A%A4%ED%81%AC%EB%A6%B0
· 전기영동: https://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000907407
· 아가로스 겔: https://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=171031001555239
· T7, SP6 promoter primer: https://international.neb.com/products/e2050-hiscribe-t7-quick-high-yield-rna-synthesis-kit#Product%20Information