서강대학교 현생실4 Ti plasmid를 통한 Agrobacterium 형질전환과 Subcellular level로의 외래 유전자발현 조사, TLC를 통한 TAG분리

소개글

"서강대학교 현생실4 Ti plasmid를 통한 Agrobacterium 형질전환과 Subcellular level로의 외래 유전자발현 조사, TLC를 통한 TAG분리"에 대한 내용입니다.

목차

I. Abstract

II. Introduction

III. Materials and Methods
1. Agrobacterium tumefaciens 형질전환
2. Colony PCR, Gel electrophoresis
3. Agarose gel electrophoresis
4. Tobacco infiltration
5. Thin layer chromatography

IV. Data & Results
1. Agrobacterium tumefaciens Transformation
2. Colony PCR and Gel electrophoresis
3. 형광단백질을 통한 외래유전자의 발현조사 – Subcellular localization
4. Nile red 염색을 통한 TAG의 생성 확인
5. TLC

V. Discussion

본문내용

 Abstract
이번 실험에서는 외래단백질로부터 형질전환한 Agrobacterium tumefaciens를 통한 식물의 형질전환을 진행했다. Colony PCR과 eYFP 형광과 WoLFPSORT, TargetP를 사용한 가능성을 토대로 한 Subcellular localization을 파악했고, Nile red staining과 TLC를 통해 WRI1과 DGAT1의 관여로 생합성 된 TAG의 검출을 진행했다. Spectinomycin, rifampicin 항생제가 포함된 YEP agar plate의 사용으로 이 항생제에 저항성을 가진 Ti-plasmid를 통해 형질전환 A. tumefaciens를 선별하고 Colony개수를 통한 형질전환 효율을 계산한 결과 WRI1, DGAT1, MAGL4, MAGL10 모두 0.01ug/ul의 plasmid DNA농도에서 높은 형질전환 효율을 보였다. 또한 WRI1는 Colony PCR결과로 전기영동의 결과에서 Band가 관찰되지 않았으며, 이는 실험적 오류로 발생한 결과로 유추할 수 있다. 형광현미경의 관찰로 WRI1은 핵, MAGL4는 세포질, MAGL10은 세포막으로 localization되는 것을 파악할 수 있었으며, 아미노산 서열로 번역한 결과로 예측한 localization 수치는 MAGL4만 일치했다. Nile red staining과 TLC를 통해 식물 잎에서의 TAG생합성에 대해 알아보았는데, WRI1과 DGAT1이 포함된 Sample에서만 TAG의 형광신호가 잘 관찰되는 것과 TLC에서의 WRI1, DGAT1 결과가 많이 이동한 것으로 보아 WRI1과 DGAT1은 TAG 생합성에 관여한다는 것을 알 수 있었다. TAG는 중성지방으로써 바이오 디젤로 사용할 수 있어 그 의미가 크다.

 Introduction
이번 실험의 사용할 Agrobacterium strain중 GV3101은..

<중 략>

참고 자료

Hooykaas PJ, Beijersbergen AG (1994). "The virulence system of Agrobacterium tumefaciens". Annual Review of Phytopathology. 32 (1): 157–181. doi:10.1146 / annurev. py.32.090194.001105.
Gordon JE, Christie PJ (December 2014). "The Agrobacterium Ti Plasmids". Microbiology Spectrum. 2 (6). doi:10.1128/microbiolspec.PLAS-0010-2013. PMC 4292801. PMID 25593788.
Johnston C, Martin B, Fichant G, Polard P, Claverys JP (March 2014). "Bacterial transformation: distribution, shared mechanisms and divergent control". Nature Reviews. Microbiology. 12 (3): 181–96. doi:10.1038/nrmicro3199. PMID 24509783. S2CID 23559881.
IUPAC-IUB Commission on Biochmical Nomenclature(CBN) (1977) Nomenclature of Lipids. Eur. J. Biochem, 79: 11-21.
Gordon JE, Christie PJ (December 2014). "The Agrobacterium Ti Plasmids". Microbiology Spectrum. 2 (6). doi:10.1128/microbiolspec.PLAS-0010-2013. PMC 4292801. PMID 25593788.
‘형질도입’, 미생물학백과, 한국미생물학회, 2021.10.28.
V.Singh and D.K.Jain (2014). "Applications of recombinant DNA". ISC BIOLOGY. Nageen Prakashan. p. 840.
‘TAG의 기능 및 산업적 이용’, 식물학백과, 한국식물학회, 2021.10.27.