Exp. 4 SDS-PAGE

목차

I. Introduction
1. SDS-PAGE 원리
2. Molecular weight determination
3. Native PAGE

Ⅱ. Chemical reagent & Apparatus

III. Methods

IV. Results
1. SDS-PAGE gel을 staining 한 후, 패턴을 분석하시오.

V. Discussion

본문내용

단백질은 polypeptide형태로 구성되고 있다. 이러한 polypeptide형태를 유지하고 있는 단백질의 각각의 size를 측정하기 위해서는 개별로 분리해야하는 작업이 필요하다. 그러기 위해서는 SDS-PAGE 기술을 이용해야한다. 본 실험에서는 생명공학에 있어 중요하고 필수적으로 다뤄지는 단백질을 SDS-PAGE기술을 통해 크기 별로 분리하며 그러한 윈리의 이해와 실험방법을 익히는 것을 목적으로 한다. 먼저 실험군 IPTG 처리군과 비처리군으로 나누어 실험하였고 각각 3개의 cell line을 분석하였다. BL21, ADH in BL21, ADH in BL21 expressing DcHSP70 각각의 3개의 cell line을 총 6가지의 cell을 SDS-PAGE를 이용해 loading하였고 비교분석하였다. 결과적으로 IPTG 비처리한 실험군의 3개의 cell line에서 모두 예측한 바와 같이 ADH단백질 크기인 약37kDa의 뚜렷한 band를 관찰할 수 없었다.하지만 미세한 크기의 band가 관찰 된 것으로 보아 비슷한 크기의 단백질이 존재함을 예측할 수 있었다. IPTG 처리군의 loading 결과에서는 BL21과 ADH in BL21, ADH in BL21 expressing DcHSP70를 비교하였더니 ADH in BL21 expressing DcHSP70에서 ADH 단백질의 발현량이 제일 높게 나타났고, BL21과 ADH in BL21에서는 별다른 차이를 보지 못했다. 따라서 HSP로 인해 다른 환경적 스트레스 요인으로부터 보호받았기 때문에 ADH in BL21 expressing DcHSP70 cell에서 높은 ADH 단백질의 발현을 볼 수 있었던 것으로 볼 수 있고, BL21에서도 미세한 크기의 band가 37kDa에서 관찰 된 것으로 보아 같은 크기의 단백질이 BL21에 존재함을 알 수 있었다. 이 실험으로 보아 조금더 정확하게 ADH발현량을 분석하기 위해서는 추가적인 실험이 필요하다고 볼 수 있었다.

참고자료

· Assay-Protocol, Sino biological Inc., Native –PAGE Priciple, www.ispybio.com
· WIKIPEDIA, silver staining, https://en.wikipedia.org/wiki/Silver_staining.