SDS page gel electrophoresis 및 western blotting 실험 목적 및 원리 보고서

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목차

1. 단백질 전기영동

2. SDS-PAGE
1) 특성
2) 과정
3) 분자량 결정
4) 적용

3. Western blot
1) 과정
2) 적용

본문내용

전기영동이란 전기장 내에서 용액 속의 하전된 물질들이 반대 전하의 전극을 향해 이동하는 현상을 말한다. 이때 하전된 물질은 펩타이드, DNA, RNA, 단백질 등 수용액에서 + 또는 – 전하를 가지는 물질이다. 수용액 속에서 펩타이드, DNA, RNA 및 단백질과 같은 시료는 확산되기 때문에 지지체로 막이나 겔을 사용하여 지지체 사이로 하전된 시료가 이동하도록 한다. 지지체로는 보통 그물 모양의 구조를 갖는 agarose gel이나 polyacrylamide gel을 사용한다. 이러한 지지체 내에서 작은 물질은 빠르게, 큰 물질은 느리게 이동하므로 분자량에 따라 시료를 분리할 수 있다. 또한 시료의 이동거리와 분자량은 거의 반비례하므로 전기영동을 이용하여 분자량을 결정할 수 있다. 전기영동의 종류로는 zond electrophoresis, agarose gel, polyacrylamide gel, isotachophoresis (ITP), isoelectric focusing (IEF), Two-dimensional electrophoresis 등이 있다.

단백질 전기영동(proetein electrophoresis)은 생명과학 연구에서 사용하는 기본적인 실험 기법으로 단백질의 특성을 연구하는 데 기초가 된다. 단백질 전기영동에 쓰이는 구성물질인 폴리아크릴아마이드(polyacrylamide)는 서로 교차 연결되어 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍을 통해 단백질이 크기에 따라 정렬되며 겔 내에 정렬된 단백질을 염료를 이용해 염색하여 가시화한다. 단백질 분자가 이동한 거리를 통해 단백질의 상대적 분자량을 분석할 수 있는데, 많이 이동한 단백질은 분자량이 작은 것으로, 적게 이동한 단백질은 분자량이 큰 것으로 간주한다.

폴리아크릴아마이드를 형성하기 위해 사용하는 화학물질은 아크릴아마이드와 비스아크릴아마이드이다. 이러한 단량체 물질을 중합하여 다공성 겔을 만든다.

참고 자료

없음