[유전학] SDS-PAGE

목차

1.Introduction
2.Material & Method
3.Result
4.Discussion

본문내용

<SDS-PAGE>
MATERIALS ＆ METHODS
* resolving(seperating) gel (12%) * Staking gel
(10㎖ 기준) (4㎖ 기준)
HO------------------- 3.3 HO------------------- 2.7
1.5M Tris (pH8.8)-------- 2.5 1.0M Tris (pH6.8)-------- 0.5
30% acrylamide mix------ 4.0 30% acrylamide ---------- 0.67
10% SDS--------------- 0.1 10% SDS--------------- 0.04
10% ammonium persulfate— 0.1 10% ammonium persulfate-- 0.04
TEMED-----------------0.04 TEMED----------------- 0.004

* Running buffer * staining buffer
5× TGS Tris(Base)------- 15.1g 0.1% coomasie Blue R-250 soln.
glycine---------- 94g HO:MeOH:AcOH(빙초산)=5:5:2
10% SDS-------- 50㎖
* Destaining buffer
adjust to--------- 1ℓ HO:MeOH:AcOH=6:3:1

1) SDS-PAGE gel 제조
- resolving(seperating) gel을 만든 후 유리판 사이에 넣어 준 후 용액이 유리판 사이에서 증발하거나 산소와 접촉하는 것을 막기 위하여 butanol을 흘려 넣어준다. gel이 굳을 때까지 방치한다.
- resolving(seperating) gel이 굳은 후 butanol을 제거하고 stacking gel을 제조하여 유리판 사이에 흘려준다. 이때 comb를 끼워 넣어준 후 gel이 굳을 때까지 방치한다.
2) Sample 제조
- 단백질 농도를 30uL로 맞추어서 5×dye와 같이 mix후 D.W로 전체부피를 10uL로 맞춘다.
- 10분간 boling 시킨다.

참고 자료

Robert F. Weaver, 분자생물학, 라이프사이언스, 2003,
이쿠타사토시, 유전자와 DNA의최첨단, 월드사이언스, 1998,
Susan R. Barnum, 생명공학, 월드사이언스, 2001,