[all a+] 연세대학교 공학생물학(2) 실험8 결과 레포트 (SDS_PAGE)

목차

1. experimental purpose
2. Result
3. Discussion
4. Further study

본문내용

1. experimental purpose
이 실험의 목적은 SDS-PAGE를 이용하여 단백질을 분자량 별로 분리하는 것을 배우는 데에 있다

2. Result
본인 분반은 단백질 sample 20µl를 사용하여 로딩하였고, 마커 3 µl를 함께 로딩해 주었다. 이를 250V전압에서 300mA의 전류로 18분 동안 running해주었다. 은 Figure 1에 SDS-PAGE를 진행한 결과를 나타내었다.

3. Discussion
A. 우리의 실험 결과, Coomassie blue staining 사진에서 눈에 띄는 밴드가 나타나지 않았다. 모든 조의 결과에서 문제가 있는 것은 전체 과정 중 다 같이 무언가 잘못하였다는 가능성이 있다고 생각한다. 단백질 샘플이 잘못되었을 수도 있지만, 마커 또한 제대로 나오지 않았기 때문에 이는 전압이나 전류 등의 조건 혹은 running buffer가 잘못되어 제대로 전개가 되지 않은 것 같다. 혹은, 크로마토그래피에서 사용한 컬럼이 잘못되어 모든 단백질이 씻겨 나갔을 수도 있다. 혹은 제대로 염색이 되지 않은 것일수도 있다. 전체적으로 행한 과정에서 문제가 생길 만한 것들은 앞서 말한 것들이 있다. 이외에도 각각의 조에서 친화도크로마토그래피 과정에서 용액을 혼동하는 실수가 있었을 수 있다. 조금 더 주의를 기울여서 다시 한 번 실험을 해볼 필요성이 있다고 판단된다. 예상하기로, 원래라면 하나의 분자량에서 굵은 밴드가 나타나고 다른 것은 나타나지 않을 것이라고 생각된다. 정확히 무엇이 잘못되었는지는 확인할 수 없지만, 이번 실험을 통해 주의 깊게 실험에 임하지 않으면 실패하게 된다는 것을 배웠다. 앞으로의 태도를 바르게 해야겠다는 생각이 든다.
B. 만약 아크릴아마이드 gel을 직접 만들어 사용한다면 필요한 Reagent는 무엇인지와 이들의 역할에 대하여 조사해보았다.
i. Gel
Gel을 궝하기 위해 Acrylamide와 Bis-Acrylamide(혹은 Methylene Bis-Acrylamide)를 적당한 비율로 섞어준다.

참고 자료

Neil A. Campbell (2017), Campbell Biology, Pearson, 11th edition, p450-45
David E. Sadava (2016), Life the science of biology, e-book edition, p363-366 881.
[미생물 실험] 단백질의 전기영동(SDS gel electrophoresis)
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220173458937&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F
dyenbio, [Dyne 12th 기초 실험방] Western blot
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=14&page=2