[유전학] Restriction enzyme digestion

목차

Ⅰ. Introduction
1. Restriction enzyme digestion
(1) 제한효소와 점착성 말단
(2) DNA 분자의 잘라 잇기와 클로닝
2. cDNA library
1) cDNA란?
2) 유전자 도서관
3) cDNA library 제조법
(3) 제한지도(restriction map)
Discussion
1. Preparation of planting bacteria, Titration & planting
2. Immobilization of 람다 DNA on NC filter
3. Prehybridization / hybridization, washing, Immunodetection

본문내용

EXP 7. Restriction enzyme digestion
EXP 8. cDNA library titer 결정
EXP 9. cDNA library screening
1. Preparation of planting bacteria, Titration & planting
이 실험은 람다 파지에 의한 감염으로, DNA가 삽입될 수 있는 bacteria를 준비하는 과정이다. 따라서 효과적인 람다 파지 감염을 위해서 LB media에 20%의 maltose를 첨가하였다. 넣어준 maltose로 인하여, bacteria의 receptor인 lamB protein이 삽입되게 된다. ....
2. Immobilization of 람다 DNA on NC filter
이 실험은 cDNA library screening을 위해, NC filter에 람다 DNA를 고정시키는 과정이다. cDNA library은, 삽입된 DNA를 포함하고 있는 박테리아에서 형성된 유전물질의 살아있는 저장소이다. Library screening은 처음으로 어떤 유전자를 cloning할 때 쓰는 방법인데, ...
3. Prehybridization / hybridization, washing, Immunodetection
이 실험은 probe를 이용하여 원하는 DNA를 삽입한 plaque를 찾아내는 과정이다. 먼저, 지난 실험에서 고정시킨 filter를 prehybridization solution에 넣고 3시간 동안 prehybridization을 한다. 이 때 hybridization solution은 0.2ml/㎠만큼 주입해야 하므로, 우리 조는 6ml(filter=30㎠)를 주입하였다.

참고자료

· http://www.kjcp.co.kr/note/lecture%20note/mole/molecular%20note/mole-4.htm
· 박상대, 분자생물학, 라이프사이언스, 2003, p66~71
· Leon A.Snyder, 일반유전학, 아카데미 서적, 1999, p.501~502