[생명공학실험 예비레포트]Restriction Enzyme & Digestion

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) 제한효소(Restriction Enzyme)
2) 제한효소의 종류
3) 제한효소의 작용 원리
4) 제한 효소의 이용
5) 재조합 DNA
6) 재조합 dna 원리 - 유전자 재조합 기술
7) Agarose gel을 이용한 전기영동(Agarose gel electrophoresis)
8) Agarose gel electrophoresis 방법

4. 기구 및 시약
1) 기구
2) 시약

5. 실험 방법

6. 참고 사항
1) 제한효소 활성 또는 전기영동에 있어 방해되는 요소
2) 제한효소 활성의 최적 조건
3) 끌림 현상(smear)
4) T-vector
5) EcoRI 명명법
6) Acetylated BSA
7) RE 10X Buffer

본문내용

ⅰ) Ⅰ형(Type1)
- 제한효소와 변형효소가 하나로 뭉쳐서 존재하고, 인식하는 염기 서열과 절단 위치가 서로 다르다. 즉, DNA 염기 서열은 특이적으로 인식하지만, 여기서 약 1,000개 염기 정도 떨어진 곳에서 DNA를 자른다. 따라서 DNA절단의 비특이성 때문에 세균이 제한 현상을 수행하는 데는 지장이 없지만, 분자생물학 실험에서는 거의 사용하지 않는다. 특이한 것은 이 효소는 자멸을 한다는 것이다. 대부분의 효소가 목표 분자에 같은 반응을 반복적으로 수행한다. 하지만 I형 제한효소는 DNA를 절단할 때 가미가 제식 공격을 하고, 자신은 파괴된다. 활성인자는 ATP, S-adenosyl methionine(SAM), 그리고 Mg^2 이다.

ⅱ) Ⅱ형(Type2)
- 유전공학에서 널리 사용되는 것으로, 활성발현에 마그네슘이온을 필요로 하며, DNA 속의 특정 염기배열(3~6개의 중앙 축으로 한 2회전 대칭을 나타냄)을 정확하게 인식 하며, 그 배열 내 혹은 그 인접부위에서 phosphodiester 결합을 절단을 하는데 II형 제한효소 종류에 따라 자르는 부위가 달라진다. 한가지 방법은 이중가닥의 두 가닥을 동시에 같은 위치에서 자르는 방법인데 그 결과 평편 말단(blunt end)이 나온다. 또 한가지 방법은 두 가닥의 다른 위치를 잘자 삐죽 내민 끝을 만든다는 것이다. 이 삐죽 내민 끝은 한 가닥만 있어 서로 염기 쌍을 할 수있다. 이를 점착성 말단(sticky end) 이라고 한다. 이렇게 정확한 절단 부위를 알고 있기 때문에 유전공학에서 널리 사용 되고 있다. 우리가 사용할 EcoRI가 II형에 속한다.

참고 자료

없음