Restriction Enzyme digestion & Ligation of DNA

소개글

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목차

1. Purpose
2.Principle
3. Materials
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Referernces

본문내용

Purpose
1.Restriction Enzyme digestion의 이해.
2.제한 효소에 의해 절단된 DNA 조각들의 크기를 전기영동 방법으로 분석.

Principle
1. Genetic engineering 유전공학
생물의 유전자에 각종 조작을 가하여 그것을 연구하고 또한 이용하려는 학문체계. 이는 분자생물학의 발전과정에서 특히 DNA 혹은 유전자를 해명하려는 노력으로 탄생한 것이며, 그 방법론의 기초는 유전자복제(단일화하여 증가하는 것)에 있다. 이것은 세포에 무상(無傷)인 DNA추출법, 고분자DNA를 크기에 따라 효율적으로 분리할 수 있는 전기영동법, DNA의 염기배열을 인식하여 절단하는 각종 제한효소의 발견과 정제, DNA를 운반하는 매개체(박테리오파지나 플라스미드)의 개발, 역전사효소의 발견과 정제, DNA염기배열의 결정법 같은 기술개발에 기초한다.

2. 재조합DNA기술
유전자 또는 DNA를 시험관 내에서 자유롭게 개변하고, 종이 다른 임의의 세포에 도입하여 복제, 발현시키는 일련의 기술.
표적으로 하는 유전자의 양측에 위치하는 DNA순서와 상동적인 염기순서를 하는 DNA단편을 돌연변이유전자 등의 양끝에 이어서 숙주에 도입하면 양측의 상동부위에서 상동적 재조합이 일어나고, 표적유전자를 돌연변이유전자 등과 교환시킬 수 있다. 제한효소연결효소법은 대표적인 재조합DNA기술이다. 재조합DNA와 매개체를 같은 제한효소로 절단하면 양쪽은 같은 부착말단을 갖게 되므로 이를 이용하여 2가닥복원한 후 DNA연결효소를 작용시켜 DNA의 절단면을 회복시키면 재조합체를 구축할 수 있다. 매개체 절단에 사용한 것과는 다른 제한효소나 기계적인 방법으로 절단한 DNA 등, 매개체와 상보적이 아닌 말단을 갖는 DNA를 이용하는 경우는 매개체 절단에 사용한 제한효소의 인식순서를 갖는 연결자를 DNA말단에 결합시킨 후, 제한효소로 처리함으로써 매개체와 상보적인 부착말단을 형성하여 이 방법에 의한 재조합체를 구축할 수 있다.

참고 자료

[네이버 지식백과] 유전공학 [genetic engineering, 遺傳工學] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 도서출판 여초)
[네이버 지식백과] 재조합DNA기술 [recombinant DNA technology, 再組合~技術] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 도서출판 여초)
[다음 백과사전] 제한효소 [restriction endonuclease, 制限酵素]
[엘피스 바이오텍] CUT-PROOFRestriction Enzymes
개정판 진단 분자생물학, 강희규 외9명, 현문사, p111~114
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미생물 실험 4과 유전자 재조합 실험 페이지 104~110
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http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
http://100.naver.com/100.nhn?docid=709429
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_ligation.php