Plasmid preparation, Enzyme digestion - 중앙대 일반생물학실험 A+ 결과레포트

소개글

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목차

Ⅰ. Subject
Ⅱ. Object
Ⅲ. Introduction
Ⅳ. Methods & Materials
Ⅶ. Reference

본문내용

플라스미드
생장에 필수적인 염색체 DNA에서 물리적으로 분리되어 있는 대표적인 에피솜 DNA분자이다. 플라스미드는 고리 모양을 띠고 있다. 세균의 생존에 필수적이지는 않으며, 다른 종의 세포 내에도 전달될 수 있다. 이런 성질을 이용해 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 자른 뒤 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용하고, 이를 통해 원하는 DNA를 만들 수 있다.

Plasmid preparation
E.coli 균에 존재하는 플라스미드 DNA를 알칼리 용해 방법(alkaline lysis method) 혹은 편의성을 위해 나온 분리 키트 제품으로 분리하는 것

Plasmid preparation의 원리
플라스미드는 대장균에 형질전환시켜 도입한 후, 이 대장균을 순수배양하여 증폭하고, 이를 손쉽게 플라스미드를 분리하여 정제할 수 있다. 염색체 DNA와 분리하는 핵심원리는 변성된 DNA가 renaturation(annealing)되는 속도의 차이를 이용한 것이다. 염색체 DNA처럼 크거나 분리과정에서 선형으로 전환되는 DNA는 renaturation되는 데 오랜 시간이 걸리는 데 비해, 플라스미드처럼 작은 환형 DNA는 renaturation이 상대적으로 빨리 이루어진다. 플라스미드 DNA를 분리하는 여러 방법 중에 Alkali lysis method가 가장 보편적으로 사용된다. 기본적인 원리는 세균의 세포벽과 세포막을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 이때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 플라스미드 DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 유사하여 분리하기 쉽지 않다. Chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 커서 이러한 성질의 차이를 이용하여 분리할 수 있다.

Alkali lysis method의 원리
1. 세포막은 유지되도록 하고, 세포벽을 깬다.

참고 자료

제한효소 활성에 대한 Methylation의 영향 – TaKaBa https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D044101
NheⅠ – TaKaBa https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=1241A
ClaⅠ – TaKaBa https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=1034A
제한효소 – 위키백과 https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%A0%9C%ED%95%9C_%ED%9A%A8%EC%86%8C
DNA preparation from E.coli – 다인바이오주식회사 http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=36
Plasmid DNA 분리 – 단국대학교 생리생화학실험실 https://cms.dankook.ac.kr/web/biophysi/gene-cloning?p_p_id=Bbs_WAR_bbsportlet&p_p_lifecycle=0&p_p_state=normal&p_p_mode=view&p_p_col_id=column-2&p_p_col_count=1&_Bbs_WAR_bbsportlet_curPage=2&_Bbs_WAR_bbsportlet_action=view_message&_Bbs_WAR_bbsportlet_messageId=36525
플라스미드 – 미생물학백과 https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5145033&cid=61232&categoryId=61232
플라스미드 – 위키백과 https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%94%8C%EB%9D%BC%EC%8A%A4%EB%AF%B8%EB%93%9C
제한효소 – 분자세포생물학백과 https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5569122&cid=61233&categoryId=61233