[생화학실험] agarose gel 전기영동을 통한 chromosoaml DNA의 분석

소개

agarose gel 전기영동, 생화학실험, chromosomal DNA 분석, 대장균,유산균

목차

1. 실험 날짜
2. 실험 제목 및 목적
3. 개요 – 이론 및 실험 원리
4. 실험재료 및 방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

전기영동의 정의 및 원리
- 전해질 중에 존재하는 하전입자에 직류전압을 걸면 정의 하전 입자는 음극으로, 부의 하전 입자는 양극으로 향하여 이동한다. 이 현상을 전기영동이라고 한다. 또한 동일 방향으로 이동하는 하전 입자의 사이에서도, 전기영동할 때 이동속도가 다른 성분은 점차로 분리되어 간다. DNA는 deoxyribose가 인산에스터 결합을 하기 때문에 phosphate group 에 의해 (-) charge를 가지며 (-) charge를 갖는 DNA가 두 전극 사이에 위치했을 때 (+)극 쪽으로 움직인다

<중 략>

1. 먼저 DNA 농도를 봤을 때, 밴드의 발색이 잘 되고 band가 굵었지만 Spectrophotometer에서 농도가 낮은 경우도 있었다. 이 경우는 260nm 파장이 DNA와 RNA를 모두 흡수 하기 때문에 순수 DNA 농도는 높지만 RNA 등의 불순물이 섞여 있어 함량이 낮게 나온 것 같다. 또 DNA 농도만 봤을 때, 낮은 이유를 생각해보면 앞의 실험의 Washing, Loading과정에서 DNA loss가 생겼을 것 같다. 반대로 밴드의 발색이 잘 되지 않았지만 Spectrophotometer에서 농도가 높은 경우도 있다. 이 경우는 전기영동 할 때 따낸 DNA가 농도가 너무 높아서 물이 따져서 전기영동에서 보이지 않았다거나, 물과 DNA가 잘 섞이지 않은 DNA를 추출해서 농도는 높지만 발색이 잘 되지 않았던 것 같다.

2. DNA 순도의 경우, A260/280 ratio = 1.8 ~ 1.9 정도가 순도가 좋다고 한다.
우리 조의 실험 결과에서는 A260/280 ratio 값이 낮은 경우는 없었지만 낮을 경우에는 DNA의 농도가 매우 낮거나, DNA의 농도는 정상적이지만 ratio가 낮은 경우 단백질 오염도가 높을거라 생각된다. 또 우리조의 실험결과에서 유산균의 ratio 값이 높게 나왔는데, DNA 농도가 높아서 그렇다기 보다는 전기영동 결과에서 밑에 RNA로 추정되는 물질이 있는 것로 조합해보면 RNA 가 섞여있거나 DNA가 fragmentation 됐을 수 있다고 생각한다. 이를 알아보려면, Rnase를 넣어 RNA를 제거하고 다시 전기영동을 하면 불순물이 RNA였는지 그 외의 물질이었는지 알 수 있을 것 같다.

참고자료

· 화학용어사전, 화학용어사전편찬회, 윤창주, 2011.1.15, 일진사
· 식품과학기술대사전, 한국식품과학회, 2008.4.10, 광일문화사
· http://blog.naver.com/tdjqtsmsqjqt?Redirect=Log&logNo=10180769062
· http://blog.naver.com/nanohelix?Redirect=Log&logNo=70179162449
· http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=171629013