1. 실험 목표항생제의 항균민감도를 kirby-bauer법을 통해 알아본다.1) 실험재료Ampicillin. Penicillin, LB 배지, spreading bar, 100% 알코올, paper disc, 핀셋, 멸균된 은박지, E.coli, B.subtillis2) 실험방법- agar 0.7g, tryptone 1g, yeast extract 0.1g, Nacl 1g을 넣어 top agar를 만든다.- LB top 배지에 E.coli 100ul 와 B.subtillis 200ul를 spreading, top agar(균주+7.5ml) 이용하여 배양한다.- 어느 정도 건조가 될 때 까지 기다린다- 멸균된 은박지를 펼친 후 paper disc를 놓고 그 위에 항생제 처리한다.(Penicillin, Ampicillin을 각각 10ul, 20ul씩)- paper disc에 처리한 항생제가 건조되면 멸균된 핀셋으로 살짝 집어 균주 접종한 배지 위에 올려놓는다(paper disc 방향 주의!)
1. 실험 목표각각의 환경인자들에 의해 미생물의 어떻게 영향을 받고 생장곡선에 어떤 변화가 있을지 직접 생장곡선을 그려보도록 한다.1) 실험재료spectrophotometer, cuvette, Baffled Erlenmeyer flask, pipette, e.coli, alcohol lamp,- 100ml M9 + glucose(pH4) 배지, 100ml M9 + glucose(pH7) 배지, 100ml M9 + glucose/lactose(pH7) 배지2) 실험방법- 액체 LB 배지에서 배양한 e.coli 균주를 2ml 따서 M9 배지에 넣어준다.- 2시간 간격으로 각 배지(Glu pH4, Glu pH7,Glu+Lac pH7)에서 e-tube에 1ml씩 분주하여 큐벳에 넣은 뒤 OD값을 측정하고, flask는 다시 배양기에 넣어 배양한다.(37도 200rpm)- 2시간마다 측정한 흡광도 값을 모두 모아 그래프로 성장곡선 형태가 나오는지 그려본다.
1. 실험 목표여러 가지 세포계수법의 원리와 방법을 알고 이를 토대로 세포를 계수한다.1) 세포계수의 종류와 방법① Hemocytomer - 일정량의 배양액을 일정 넓이의 검경 면적 위에 놓고 Hemocytometer 또는 페트로프 하우저 계수기를 이용해 일정 공간에 존재하는 미생물수를 현미경으로 관찰,측정하는 방법이다. 일정량의 세포 부유액을 눈금이 있는 hemocytometer안에 넣고 눈금 안에 보이는 cell수를 현미경으로 측정하여 단위 부피당 세포수를 계산한다. 단점은 액체 시료로만 가능하며, 따로 염색을 하지 않으면, 죽은세포와 살아있는 세포를 구별할 수 없고, 측정자에 따라 오차가 심할 수 있다.하지만 단시간에 결과를 얻으며 조작이 쉽다는 장점이 있다. 정확한 측정을 위해 균체 농도는 10ⁿ7/ml 이상이 적당하다. Hemocytometer의 눈금은 크게 가로 세로 1mm의 정사각형 9개로 구성된다. 가운데 중앙의 정사각형은25칸이며, 보통 대각선 방향의 1mm칸 네 칸에서 각각 센 다음 평균을 구한다.