재조합 플라스미드를 이용한 대장균의 형질 전환

소개

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목차

1.실험목적
2.실험배경
3.실험재료
4.실험과정
5.실험결과
6.고찰
7.참고문헌

본문내용

Ⅰ. 실험목적
α-amylase gene을 포함하는 플라스미드를 ampicillin 내성 유전자를 marker로 하여 competent cell인 E.coli에 도입시키는 형질전환 실험을 통해, 나아가 우리가 발현시키고자 하는 유전자로 재조합된 플라스미드를 대장균에 넣어 형질전환 시켜 원하는 단백질을 발현시키고 대량 생산하는 방법을 이해한다.

Ⅱ. 실험배경
1. 재조합 DNA 기술 : 유전자 조작이라고 불리며 특정한 유전형질을 갖는 유전자를 삽입하거나 제거하는 조작을 통해 새로운 재조합 DNA를 만드는 과정이다.
① 원하는 단백질을 암호화하는 유전자를 가진 세포로부터 DNA를 분리한다.
② 분리된 유전자 DNA와 플라스미드를 동일한 제한효소로 처리하여 절단시킨다.
③ 절단된 DNA 조각과 플라스미드를 섞고 DNA연결효소로 재조합 플라스미드를 만든다.
④ 재조합 플라스미드를 숙주 세균에 형질전환시키고 배양한 후 원하는 유전자를 가진 재조합균주(recombinants)를 분리한다.
⑤ 재조합균주를 배양하여 원하는 단백질을 대량으로 생산한다.
재조합 DNA 기술은 식량생산, 신의약품 합성, 환경문제 해결 등 광범위하게 응용되고 있다. 성장호르몬, 인슐린, 인터페론(항바이러스성 약제), protease, glucoamlyase, α-amylase, glucoisomerase 등 의약품, 식품가공이나 세제용 효소가 이미 대량생산되고 있다. 또 질병, 해충, 제초제에 대해 저항성을 갖는 유전자 변형 농산물(GMO)들도 생산되고 있다.
2. 형질전환(Transformation) : 미생물인 박테리아들은 접합을 통해 다른 개체와 직접적으로 연결되어 유전자를 주고받을 뿐 아니라, 주변 환경에 존재하는 다양한 DNA 조각들을 받아들여 이들을 마치 원래부터 가지고 있었던 것 마냥 자기 DNA에 끼워 넣어 이용하기도 한다.

참고자료

· 오계헌 외, 『최신 미생물실험』(신광문화사) : p.241 ~ 244
· 박영현 외, 『식품미생물학 및 실험』(보문각) : p.180 ~ 183
· http://navercast.naver.com/contents.nhn?rid=21&contents_id=3447
· http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=2908&docId=331990&mobile&categoryId=2908
· http://genehunters.co.kr/