Alkaline phosphatase(AP)의 정제

소개

생명과학실험 레폿 A+받은 자료입니다~

목차

Ⅰ.실험 제목

Ⅱ.실험 목적

Ⅲ.원리
(1) Alkaline phosphatase
(2) Column
(3) Ion Exchange chromatography

Ⅳ.실험재료

Ⅴ.실험방법

Ⅵ.결과

Ⅶ.토론
(1)실험 시 특이사항
(2)Elution buffer(NaCl buffer)의 농도를 달리하여 elution하는 이유는?
(3)Elution을 하면 할수록 bead의 색이 옅어지는 이유는?
(4)실험 조건이 같음에도 불구하고 조마다 실험 속도가 차이나는 이유는?

Ⅷ.참고문헌

본문내용

Alkaline phosphatase(AP)의 정제

Ⅱ.실험 목적
DEAE ion exchange column을 이용한 AP단백질의 정제기법을 이해하고 습득한다.

Ⅲ.원리
(1) Alkaline phosphatase
Phosphatase는 인산화 되어있는 분자에서 인산기를 제거하는 효소이다. 대개 생체내의 효소는 특정한 기질과만 반응하는 기질 특이성을 지니는데, Alkaline phosphatase 같은 경우에는 특정한 기질과만 반응하지 않는 nonspecific phosphatase에 해당한다. 이름에 Alkaline이 붙은 이유는 이 효소가 작용할 수 있는 최적의 환경이 염기성이기 때문이다. 보통 homo-dimer로 작용하며 크기는 에 해당한다.
(2) Column
크로마토그래피에서 분리의 장이 될 수 있는 상태로 한 크로마토 관. 충전제를 채우거나 내벽에 고정상 액체를 코팅한 크로마토 관을 지칭하는 경우가 일반적이지만, 내벽에 화학결합기를 도입하거나 흡착 크로마토그래피용으로 부식시킨 크로마토 관도 포함된다. 구리제, 스테인리스제, 유리제 또는 합성 수지제가 있으며, 모양은 나선형, V자형, 직선형 등이 있다.
(3) Ion Exchange chromatography
Ion Exchange chromatiography에 의한 단백질의 분리정제는 Isoelectric focusing처럼 단백질 표면에 노출된 아미노산의 ionic properties가 다른 것을 기반으로 한다. 단백질의 isoelectric poion(pI)는 표면에 노출된 아미노산의 net charge가 zero가 되는 pH로 ion exchange chromatography에 의한 단백질 정제 전략을 수립하는데 매우 중요한 인자이다. pI보다 높은 pH에서는 단백질의 net charge가 negative하므로 positive charged group이 붙어있는 resin, 예를 들어 DEAE(diethylamino ethyl) sepharose에 결합시켜 분리할 수 있다.(이를 anion exchange chromatography라 한다.)

참고자료

· 한국교원대학교 과학교육연구소(2011),『화학실험』, (주)금성출판사, pp.55
· David W. Oxtoby, H. Pat Gillis, Alan Campion(2008), 『Principles of Modern Chemistry, 6th Edition』, 사이플러스, pp.190192
· 네이버 지식백과, 2013,03,24, http://terms.naver.com/entry.nhn cid=2905docId =1596442mobilecategoryId=2905.htm
· 위키백과, 2013.03.24, http://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%8C%8C%EC%9D%BC:Di ethylaminoethylcellulose.png.htm