DNA cloning

소개

DNA cloning 설명, 과정, 종료, selection 방법 등

목차

1. cloning이란?
2. cloning의 과정
3. vector DNA
4. Plasmid를 이용한 Cloning
5. bacteriophase λ를 이용한 Cloning
6. 선별(selection)
(1) 항생제 저항성 이용
(2) pBluescript II SK+ 이용

본문내용

1. cloning이란?
DNA를 조작하여 조작된 DNA를 증식시켜 원하는 DNA를 다량으로 얻어내는 것을 cloning 이라고 한다. 조작된 DNA를 실은 vector를 박테리아에 넣어주어 조작된 DNA가 박테리아 핵 내에 삽입되는 방법을 이용하여 증식시키기도 하며 PCR을 이용하여 증식시키기도 한다. cloning 과정에 의해 재조합 된 개체의 모임을 clone 이라 부른다. 즉 cloning 과정의 목적은 조작된 DNA를 다량으로 얻어내는 것이다.

2. cloning의 과정
1) 유전자를 설정하고 그 유전자를 얻어낸다.
2) 얻은 유전자를 vector에 삽입한다.
3) 유전자가 삽입된 vector(recombinant DNA)를 bacteria 세포 내로 주입한다.
4) 재조합 DNA 분자를 `복제'를 통해 증폭시킨다.
5) 수많은 세포 분열을 통해 클론을 생성시킨다.
6) Bacteria 중에서 올바르게 만들어진 clone을 확인하고 선택한다.

3. vector DNA
- 절단된 유용한 DNA의 조각을 이어서 증폭시키기 위해 사용되며, 스스로 증식할 수 있 는 DNA분자
- DNA단편을 운반해 숙주세포의 내부까지 운반해 주는 운반체
- 플라스미드(plasmid)나 박테리오파지(bacteriophage)

4. Plasmid를 이용한 Cloning
1) 동물의 유전자로부터 절단 효소 BamHI를 이용하여 타겟 DNA 절편을 획득
2) 작은 원형 DNA인 plasmid를 E.coli에서 분리
3) BamHI로 plasmid 한 곳을 절단
4) DNA 연결 효소로 동물 유전자가 삽입된 원형 plasmid를 재조합
5) Transformation (형질 전환)
6) 복제: 박테리아 증식
6) DNA 절편을 분리

5. bacteriophase λ를 이용한 Cloning
1) 부착: 박테리오파지 입자가 박테리아와 조우 (박테리오파지는 박테리아 막의 특정 구성 물질을 인식하여 박테리아 세포막에 부착)
2) 주입: 박테리아 세포막에 부탁한 박테리오파지는 자신의 유전물질을 숙주 세포로 주입
3) 복제: 박테리아로 유입된 박테리오파지의 유전물질은

참고자료

· 없음