10주차_cloning

목차

I. Purpose

II. Theory
1. molecular cloning
2. ligation (T4 DNA ligase)
3. Heat inactivation

III. Apparatus/reagent

IV. Procedure
1. Ligation
2. Transformation & Plating
3. Protocol

V. Data&Results
1. Ligation ratio, volume 계산
2. Plating 결과

VI. Discussion

본문내용

Purpose: Molecular cloning의 원리를 이해하고 형광 단백질 발현 plasmid를 만들어본다.

Theory
1. molecular cloning
molecular cloning은 분자 생물학에서 recombinant DNA를 만들거나 숙주 내에서 replication을 할 때 사용되는 실험적인 기법으로 cloning은 하나의 분자가 복제되어 서로 동 일한 DNA 분자의 cell 군집을 형성하는 것을 의미한다. 일반적으로 molecular cloning은 서로 다른 유기체에서 유래한 DNA sequence를 이용하는데, 하나의 유기체는 cloning되는 DNA source 역할을 하고, 다른 하나의 유기체는 recombinant DNA가 복제될 수 있는 host가 된다. 전통적으로 molecular cloning을 진행할 때, cloning될 DNA는 유기체에서 추출되어 test tube 에서 enzyme으로 절편화된다. 그리고 형성된 fragment는 vector DNA와 recombinant DNA를 만드는데 사용된다. 이러한 방법은 bacteria cell이 DNA를 exponential하게 복제하는 성질을 이용했다. 최근에는 plasmid에 서로 다른 sequence의 DNA를 넣어 gene을 운반하는 vector로 사용하고 있다. cloning을 이용하면 특정한 단백질을 발현하거나, 가공된 DNA를 다량으로 복 제하여 연구하는데 사용할 수 있기 때문에 생명공학의 기초 기법으로 사용된다.
molecular cloning을 위해서는 먼저 bacteria에서 분리한 plasmid DNA를 restriction enzyme 을 이용해서 표적하는 서열만을 잘라내는 digestion과정을 거쳐야 한다. 이 과정은 vector cut 과 insert cut(발현하려는 성질을 가진 DNA cut)을 만드는 preparation 과정에 해당하는데, 이 때..

<중 략>

참고 자료

jeremy M.Berg, Biochemistry, 8th, W. H. Freeman, 2015, pp145-153