TA 클로닝

소개

TA 클로닝을 이해하고 Ligation과 Transformation의 원리를 이해하고 실험하는것에 관한 레포트입니다

목차

실험목적

실험이론
- TA클로닝
- DNA LIGATION
- Competent cell
- LB plate
- Transformation
- 항생제와 LacZ를 이용한 selection
- 항생제를 이용한 selection
- LacZ를 이용한 color selection
- Selection의 결과

실험과정

실험결과 및 느낀점

본문내용

LB plate ( Luria - Bertani medium)

LB 배지는 실험실에서 가장 많이 사용하는 배지 중 하나로 보통 세균을 키울 때 많이 사용한다. 곰팡이나 방선균을 키울때는 주로 밀기울을 이용한 탄소원이 주가되는 배지를 사용한다.
LB 배지는 트립톤 10g, yeast extract 5g, Nacl 10g에 D.W 850ml를 넣어 완벽하게 녹여준다. pH는 7 (6.5~7.5) 사이로 맞추는것이 좋은데 pH가 높을 경우 Hcl을 넣고 pH가 낮을 경우 NaOH를 넣어주고 메스실린더로 최종 부피를 1L로 맞춘다. 고체 배지를 만들 경우 1.5%의 microAgar을 넣어주며 액체배지를 만들 경우 넣지 않는다. 멸균을 위해 Autoclave (120°, 20분) 한 후 어느 정도 식힌다. 고체 배지의 경우 clean bench에서 LB배지를 plate에 20ml 정도씩 분주한 후 뚜껑을 조금 열어 굳힌다. 고체배지가 다 굳으면 랩으로 싸주거나 파라필름으로 감아준다음 보관한다.
트립톤은 단백질을 산이나 알칼리 효소에 의해 불특정 무작위로 분해해 가용성물질로 만든 것으로 분해시 트립신을 이용해 생성시킨 펩톤을 트립톤이라 한다. 아미노산을 공급해줘 질소원으로 이용된다.
yeast extract는 이스트를 갈아서 건조시킨 것으로, 분리하는데 시간과 비용이 많이 들어 성분은 밝혀지지 않았다. 미생물이 자라는데 필요한 필수아미노산이나 인지질, 비타민 등 영양물질을 제공한다 yeast extract를 넣어주면 균이 잘 자라더라해서 계속 사용하고 있다.
Nacl은 배지의 삼투압을 유지해 세균들이 터지지 않게 하기 위해 넣는다.

참고자료

· 없음