[생물학 실험보고서] DNA ligation and Transformation

소개글

DNA 재조합을 목적으로 두 개의 DNA를 연결하는 원리를 배우고, 외부 DNA를 대장균 vector에 접합시켜 형질전환 시킨 다음 배지에 도말 하여 DNA Clone을 얻는 실험입니다.

목차

Abstract

Introduction

Materials and Methods

Data and Result

Discussion

본문내용

이번 실험은 DNA 재조합을 목적으로 두 개의 DNA를 연결하는 원리를 배우고, 외부 DNA를 대장균 vector에 접합시켜 형질전환 시킨 다음 배지에 도말 하여 DNA Clone을 얻는 것이다. Vector와 Insert의 비율은 1:3 이었고, DNA Ligase는 T4 DNA Ligase를 사용하였다. 형질전환에는 초반 실험에서 만들었던 Competent Cell Stock을 사용하였으며, Blue-white screening을 이용하기 위하여 X-gal과 Ampicillin 및 LB를 포함한 배지에 도말 하였다. 실험결과, Blue colony와 White colony가 생성되기는 했지만 희미하고, 그 크기도 작아 육안으로는 관찰이 가능했으나, 사진으로는 나타나지 않았다.


Introduction
전통적으로 DNA의 재조합은 Ligation을 통해 이루어져 왔다. Ligation은 문자 그대로 DNA 나 RNA의 끝을 이어주는 과정이며 이 반응에 이용되는 효소를 Ligase라고 한다. 그런데 유전자 재조합을 하기 위해서는 우선, DNA를 원하는 모양으로 자르는 과정이 필요한데, 이 역할을 하는 것이 제한효소 (restriction enzyme)이다. 제한효소는 주로 세균이 갖고 있는 DNA를 자를 수 있는 효소(endonuclease)로서, 세균이 외부 DNA(virus)를 제거하기 위한 수단으로 만드는 것이다. 하지만 세균 자신의 DNA는 methyl화시켜 보호되므로 피해를

참고 자료

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연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 http://biochemistry.yonsei.ac.kr/
http://bitesizebio.com/