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[생화학 실험보고서] TA cloning을 통해 Insert를 T-vector에 ligation하고, LacZ를 이용하여 selection

*태*
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최초 등록일
2012.07.19
최종 저작일
2011.05
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소개글

TA cloning을 통해 Insert를 T-vector에 ligation하고, LacZ를 이용하여 selection하는 법을 배우는 실험입니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재
7. 실험방법
8. 실험결과
9. 고찰

본문내용

이는 사용한 제한효소인 NcoI이 vector와 WT에 존재하는 sequence만을 절단하는 성질을 이용한 것이다. 그러므로 deletion mutant의 경우 제한부위가 없기 때문에 NcoI이 절단하지 못하여 band가 하나만 존재하는 것이다. WT의 경우 band가 4.1 kb, 1.3 kb로 나타날 수도 있는데, 이는 T-vector에 삽입되는 insert의 방향이 반대인 경우이다. 실험적인 오차가 아니라 방향성의 문제임을 확인하기 위해서는 insert에 labeling을 하는 등의 다른 방법을 고안해야 한다.
5) LacZ를 이용한 selection
Insert가 LacZ gene의 사이에 위치하기 때문에 insert가 삽입된 T-vector를 갖는 E-coli는 LacZ gene을 발현시켜 β-galactosidase의 역할을 수행하지 못한다. Selection에는 X-gal (5-bromo-4-chloro-3indolyl-D-galactopyranoside)와 IPTG, ampicillin을 사용하는데, IPTG는 lac operon에서 lactose가 수행하는 lac operon inhibitor를 inhibition시키는 gene의 inducer 역할을 하고 X-gal은 β-galactosidase에 의해 분해되어 푸른색을 띄므로 lactose 대신 사용한다.

참고 자료

없음
*태*
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전문분야
자기소개서, 방송통신대, 의/약학
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