sogang 2-2 full report

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

I. Abstract
위 실험에서는 TA clonig을 통하여 insert로 pure PCR product를 사용해서 pGEM-T vector랑 recombinant해서 DNA의 증폭의 유발을 이끌어냈다. 후에 lac Z selection을 통해 형질전환이 끝난 콜로니를 골라낸다. alkaline lysis로 mini scale preparation를 통해 plasmid DNA 추출과 정제를 위 실험의 목표로 한다. 위 실험은 TA cloning으로 진행되었는데 이것은 PCR product에서의 3’-A overhang가 T vector와의 결합을 유도해주는 클로닝이다. LacZ Selection이란 lacZ gene로부터 생성되는 β-galactosidase으로 X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)의 분해여부로 색이 변화되어지는 특징을 이용해 세포의 선별을 이뤄낸다. LacZ selection으로 플라스미드에서 재조합유전자가 잘 포함되어지면 white colony가 보여지고 그렇지 않은 경우엔 blue colony가 보여진다. Mini scale DNA preparation이란 염기의 조건 속에서 DNA conformation로 인해 변성 정도가 다르다는 점을 이용하여 플라스미드 DNA만의 분리를 유도하는 기법이다. PCR probuct와 Gel extraction하여 purification한 후에 전기영동한 결과 750bp의 부근에서 band가 선명하게 관찰되어진 것을 알 수 있다. TA cloning를 하고 DH5α의 형질전환을 거친 후 배양한 LB Agar (AmpR+X-gal+IPTG) plate에서는 White colony 3개와 Blue colony 여러 개, LAX plate에서는 White colony 0개와 Blue colony 여러 개가 만들어 졌다는 것을 육안으로 확인할 수 있다. mini-prep을 해준 DNA의 전기영동 결과로는 대략 2kbp의 부분에서 밴드가 보여졌다.

참고자료

· T. A. Brown, 2016, Gene Cloning & DNA Analysis, 7th ed, Wiley Blackwell, pp 185-201
· Campbell et al, 2016, Biology, 11th ed., New York, Pearson, pp 311-328
· Michael R. Green, Joseph Sambrook, 2002, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th ed, Cold Spring Harbor Laboratory, pp 244-256