탄수화물의 정성 및 정량 분석

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[2] 탄수화물의 정성분석법
(대상의 물질이 어떤 성분으로 구성되어 있는지 알 목적으로 행하는 분석법의 총칭)
: 미지의 탄수화물을 확인하기 위한 정성분석법으로 많은 방법들이 존재하여 왔다. 그 방법의 기본적인 원리는 C-1 Carbon의 aldehyde group이 존재하여 환원력이 있는가, 또는 오탄당과 육탄당의 성질의 차이에 의한 구분, 혹은 ketose와 aldose 인가를 구분하는 실험 등으로써 미지의 탄수화물의 종류를 확인할 수 있다.

① Benedict Test
C-1 에 free aldehyde가 존재하는 당, 즉 단당류나 혹은 reducative disaccharide (maltose, lactose)는 산화제와 반응하여 acid가 되고 산화제를 환원시킨다. 환원된 산화제는 발색반응을 일으켜서 간편하게 reducing sugar를 확인할 수 있다. Reducing sugar의 확인에 가장 널리 사용되는 시험으로써 Benedict 시험이 있다. Benedict 시약은 sodium citrate 와 dehydrate Na3CO3 을 녹인 수용액에 CuSO4 . 5H2O가 혼합되어 생성되며 산화력을 지닌다.

② Bial Test
오탄당은 진한 염산과 함께 가열하면 푸르푸랄로 변하며 이는 Fe3+ 존재하에서 3,5-dihydroxytoluen과 축합되어 청록색의 물질을 만든다. 그러나 이러한 발색반응은 오탄당에 특이한 반응은 아니며 육탄당도 진한 염산과 함께 오랫동안 가열하면 Hydroxymethyl 프르푸랄로 되어 이것 역시 3,5-dihydroxytoluen과 축합되어 황갈색을 띤 물질을 만들게 된다. 따라서 색상의 구별을 통해 오탄당과 육탄당의 구분을 할 수 있다.

③ Seliwanoff Test
Ketose는 일반적으로 aldose에 비해 염산에 의해 더 빨리 탈수반응을 일으켜 푸르푸랄 유도체가 되고 이것이 m-dihydroxybenzene과 반응하여 붉은색의 혼합물이 만들어진다. Aldose도 염산에 의해 푸르푸랄 유도체가 생성되므로 가열시간에 주의하여야 한다.

④ Galactose Test
단당류 / 이당류는 진한 질산에 의해 잔화되어 aldaric acid가 되며 galactose에서는 muric acid가 생긴다. Muric acid는 질산에 대한 용해도가 아주 작아서 곧 침전을 만들거나 특이한 모양의 결정으로서 석출되므로 galactose를 확인할 수 있다.

참고자료

· http://club.byulnow.com/app/webclub/fpermit/club_menu.cgi?idx=bio#null
· http://purecolony.wezip.co.kr/zb/zboard.php?id=report&page=1&sn1=&divpage=1&sn=on&ss=on&sc=on&keyword=탄수화물&select_arrange=headnum&desc=asc&no=48
· 생물학-생명의 과학. 로버트 A. 월리스. 을유문화사. 1993. pp.69~76
· 실험생화학. 한국생화학회. 탐구당. 1997. pp.241~271