플라스미드 DNA 분리 방법 및 원리 리포트

소개

플라스미드 DNA 분리 정제 과정의 실험 순서와 분리 방법의 원리를 도표와 함께 정리한 리포트 입니다.

구제적인 내용 설명을 통해 보고서 점수 A+를 받았습니다.

목차

1. Plasmid DNA 분리의 원리

2. Plasmid 분리에 사용하는 시약

3. Plasmid 분리 실험과정

본문내용

Plasmid DNA 분리
* point : purity
Plasmid DNA 분리의 원리
miniprep이라고 부름 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법
- Alkali lysis method
기본적인 원리 : cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리
chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분은 chromosomal DNA는 linear 형태가 되고 크기가 크기 때문에 분리할수 있다
Plasmid 분리에 사용하는 시약
Solution I
50 mM glucose
25 mM Tris-Cl, pH 8.0
10 mM EDTA
EDTA는 세포벽의 integrity를 유지하는 데 필수적인 calcium ion을 제거
glucose는 삼투압을 유지
꼬작꼬작
Solution II
0.2 N NaOH
1% SDS (sodium dodecyl sulfate)
SDS는 ionic detergent로 세포막을 깨는 일
NaOH는 DNA를 denaturation
Solution III
5 M potassium acetate, glacial acetic acid
Renature시키는 산성용액입
Chromosomal DNA + SDS + potassium
Plasmid 분리 실험과정
1. Inoculation : 세균에서 plasmid DNA를 분리하려면 먼저 세포를 많이 키워야 합니다.
37°C 배양기에서 흔들면서 하룻밤 동안 키웁니다(shaking incubation)

참고자료

· 없음