plasmid DNA추출 예비 보고서

소개글

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목차

1.실험일자
2.실험제목
3.실험목적
4.실험원리
(1) 수용액에서의 DNA
(2) DNA 변성(denaturation)
(3) Supercoiled DNA와 linear DNA
(4)플라스미드 DNA 추출 원리
5.실험방법
6.참고문헌

본문내용

2. 플라스미드 DNA 추출 원리
플라스미드 DNA를 분리하는 방법에는 여러 가지 방법이 있지만, 가장 보편적으로 사용되는 방법은 알칼리 용균법(alkali lysis method)이다. 기본적인 원리는 대장균의 세포벽과 세포막을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 대장균은 염색체 DNA와 플라스미드 DNA를 둘 다 가지는데 이들은 물리적 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 염색체 DNA는 선상(linear form) 형태이며 플라스미드 DNA 분자가 훨씬 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다.
알칼리 용액(용액Ⅱ)을 가하여 세포를 녹인 후, 이를 산성용액(용액Ⅲ)으로 중화시키면서, DNA를 침전시키는데, 이때 염색체 DNA는 크기 때문에 침전이 되는 반면 플라스미드 DNA는 분자량이 작아서 침전되지 않는다.
(1)플라스미드(plasmid)
플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모종 이외의 작은 원형의 DNA분자이다. 플라스미드에는 약제에 대한 저항성을 가진 내성인자, 세균의 자웅을 결정하는 성결인자 등이 발견되고 있다. 세균의 생존에 플라스미드의 존재가 필수적인 것은 아니며, 박테리아의 유전자와는 독립적으로 분열할수 있는 능력을 가지고 있다. 그러한 이유로 유전자 클로닝을 위한 벡터로 많이 사용된다.
(2)유전자 재조합
유전자 재조합 기술이란 어떤 생물에서 뽑아낸 특정 DNA를 잘라 운반체 DNA에 삽입하여 재조합 DNA를 얻은후 세균과 같은 생물체에 넣는 과정을 말한다. 이를 통해 다른 생물체 내에서 인슐린과 같은 생체물질을 대량으로 얻을 수 있다. 유전자 재조합 기술에 의해 생성된 재조합 DNA를 복제 시켜 여러개의 똑같은 DNA분자를 만들어 내는 것을 DNA 클로닝 이라고 한다. 이렇게 하려면 먼저 재조합된 DNA를 대장균과 같은 숙주세포에 넣어 준 다음 재조합된 DNA를 가진 숙주세포만을 선택해서 대량으로 증식시켜야만 한다.

참고 자료

없음