[분자유전학실험]6.Western blot

소개

실험서입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract

혼재된 protein에서 antibody를 이용하여 western blotting 함으로써 우리가 원하는 미량의 특정 protein(DcHSP17.7)을 보다 정확하게 검출하여 그 발현여부를 알아보는 실험이다.
실험은 blocking과정을 먼저 실행하고 우리가 원하는 DcHSP17.7에 primary antibody를 붙여준다. 그리고 washing과정을 거쳐 secondary antibody를 붙여주고 다시 washing과정을 거친 후에 암실에서 develop한다. Blocking과정은 탈지분유를 이용하는데, 비특이적인 단백질인 탈지분유는 antibody가 membrane에 붙지 못하도록 blocking하여 탈지부위가 로딩한 부분이외에 antibody가 붙게 하도록 한다. 그리고 western Blotting에 사용하는 Antibody에는 특이적이라 정확히 하나에만 결합이 가능한 monoclonal antibody와 monoclonal antibody에 비해서 특이적이지 않아서 비슷한 여러 개의 결합이 가능한 polyclonal antibody 중 우리 시험에서는 polyclonal antibody를 사용하였다.
실험결과 17.7KDa에서의 band를 살펴보면 잎과 줄기 모두에서 heat stress를 가한 시간에 따라 band의 굵기나 진하기가 더 두껍고 진해졌으며, 이는 DcHSP 17.7이 heat stress를 오랜 시간 받을수록 더 많이 발현되었음을 알 수 있다. 그리고 band의 굵기나 진하기는 잎에 비하여 줄기가 더 진하고 굵은 것을 볼 수 있는데 이는 heat stress가 가해지면 잎보다 줄기에서 더 많은 양의 heat shock protein이 발현되었음을 알 수 있다.

2. Introduction

• Western blot
Western Blotting은 SDS-PAGE에 의해 분리된 단백질들을 모세관 작용 혹은 전기영동 상에 의해 분리 gel로부터 지지막(supporting membrane)으로 옮기는 과정 거친다. 이렇게 하면 gel 내에서 분리되어 있던 거대 분자가 막에 이동되어 똑같은 복제판(replica)을 가지는 지지막을 얻을 수 있다. 이렇게 옮기는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고

참고자료

· • 분자생물학, 아카데미서적, 김병흥 저, 315~317pp
· • 분자생물학 노트, 유전공학연구소, 곽주원외 2인, 158~162pp
· • http://www.cartage.org.lb/en/themes/sciences/lifescience/generalbiology/physiology/
· LymphaticSystem/Antibodymediated/Antibodymediated.htm
· • http://blog.naver.com/hfotena?Redirect=Log&logNo=40117614188
· • http://blog.naver.com/stagent?Redirect=Log&logNo=100035828001