상업용Invertase SDS-PAGE,Western Blotting 실습

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최초 등록일
2014.10.19
최종 저작일
2014.10
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목차

1. 실험 번호: 실험 주제
2. 실험 목적
3. 실험의 이론적 배경 및 주의사항
4. 시약 및 재료
5. 실험 방법
6. 결과 및 논의
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험 번호: 실험 주제
- 실험1. 상업용Invertase SDS-PAGE,Western Blotting 실습

2. 실험 목적
- SDS-PAGE,Western Blotting 실험 절차를 익힌다.
- SDS-PAGE와 Western blotting를 통해 Invertase의 분자량을 확인하고발현된 단백질이 원하는 단백질인가를 확인한다.

3. 실험의 이론적 배경 및 주의사항
- 배경 :
① SDS-PAGE
생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기영동 이동성(분자량,protein folding, posttranslational modification)을 이용한 기술이다.

<중 략>

5. 실험 방법
<SDS-PAGE>
1) 실험에 필요한 시약들을 미리 제조하고, 기구들을 준비한다.
2) 바닥에 휴지를 깔고 spacer plate, short plate, 스펀지받침대를 70% Etoh로 소독해준다.
3) Casting frame의 앞쪽으로 short plate가 오도록 spacer plate와 잘 겹쳐서 결합시킨다.
4) casting stand의 아래에 스펀지받침대를 놓고 casting frame을 잘 밀착하여 고정시킨다.
5) D.W를 넣어 물이 세는지 확인한다.
6) casting stand를 뒤집어 D.W를 따라버리고, kim wipes를 가져다 대어 물기를 완전히 제거한다.
7) 10% Separating gel을 만든다.

<중 략>

6. 결과 및 논의
본 실험에 앞서 SDS-PAGE 예비실험을 해본 결과이다. Invertase는 당단백질로써 SDS-PAGE서 확인 할 때에 밴드가 또렷하지 않고, 퍼지는 현상을 확인 할 수 있었다. 이를 토대로 Size marker와 비교하였을 때 크기는 95kDa으로 확인 할 수 있었다. 저번 동계현장실습을 갔을 때에는 gel이 만들어 져있는 것을 써서 편했는데 이번에는 gel을 만들어 실험하여서 생소하고 시간도 더 소모되었다. 예비실험은 성공적으로 잘되었고 이를 통해서 주의해야할 사항들과 절차를 잘 익힐 수 있었다.

참고 자료

생화학 및 생명공학 실험 #11 Western blotting|작성자 익룡이야
[네이버 지식백과] 단백질흡입[법] [western blotting, 蛋白質吸入[法]]
(생명과학대사전, 2008.2.5., 아카데미서적)
http://blog.naver.com/shinefact/220029214202
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