[분자세포생물학] PCR-Southern hybridization

최초 등록일
2016.03.02
최종 저작일
2006.03
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목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

Ⅱ. Material
- PCR product
- Denuturation soln (0.5M NaOH, 1.5M NaCl)
- Neutralization soln(1.5M NaCl, 0.5M Tris-HCl)
- 10×SSC (NaCl 87.65g+sodium cirate 44.15g/l)
- Nylon membrane, filter paper
- maleic buffer (100mM malic acid, 150mM NaCl, pH7.5)
- 10% Blocking soln(5×SSC, 50% formaide 10ml, 0.1% N-laurasoncosin, 0.02%SDS,
2% Blocking soln)
- hybtidization soln (prehybridization soln + probe)
- washing soln Ⅰ(2×SSC, 0.1% SDS)
- washing soln Ⅱ(0.5×SSC, 0.1% SDS)
- washing buffer (0.1M maleic acid, 150mM NaCl, 0.3% Tween20 pH7.5)
- detection soln(100mM Tris-HCl, 100mM NaCl pH 9.5)
- dig-Alkaline phosphatase, western blue, hybrid machine, electrophoresis kit

Ⅲ. Method
1. 저번 시간에 수행하였던 PCR product을 전영동 후 사진을 찍는다.
2. gel denaturation : denaturation soln으로 15분
3. 간단히 D.W 세척
4. gel neutralization 처리 : neutralization soln으로 15분
5. 간단히 D.W 세척
6. capillary transfer
1) plastic transfer
2) gel을 뒤집어 올려놓고 그 위에 Nylon membrane 올려놓는다.
3) filter paper 올려놓는다.

참고 자료

정연보, 유전자 감식, 탐구당, 2001,
정해영, 신분자유전학, 신일상사, 1999,
정병균, 진단분자생물학, 현문사, 2000,

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