Plasmid DNA 정제 /제한 효소 처리에 의한 Plasmid DNA의 확인

소개

토론과 고찰을 포함한 실험 레포트 입니다.

목차

실험 1. Plasmid DNA 정제
목적/이론/ 실험 재료 및 시약/ 실험 방법/ 결과/ 토론/ 추가사항 /참고

실험 2. 제한 효소 처리에 의한 Plasmid DNA의 확인
목적/이론/ 실험 재료 및 시약/ 실험 방법/ 결과/ 토론/참고

본문내용

실험 1. Plasmid DNA 정제
날짜 2007 4. 3
목적 E.Coli colony에서 plasmid DNA 만을 분리하는 과정을 익히고, 분리된 DNA의 양과
정제도를 측정해본다.

이론
Prokaryotic cell의 DNA는 eukaryotic cell의 DNA보다 상대적으로 단순하다. 박테리아는 chromosomal DNA와 함께 환형의 plasmid라는 DNA를 가지고 있다. . Plasmid는 antibiotic resistance gene들을 가지고 있기 때문에 박테리아에게 유용하고, 이는 박테리아가 다양한 환경에 적응하고, 살아남을 수 있도록 돕는다. 플라스미드는 박테리아 내에서뿐만 아니라, 생명공학 연구에서도 유용하게 사용된다. 형질전화이라는 과정을 통해, 유전자가 플라스미드 내로 삽입될 수 있으며, 박테리아의 빠른 복제 속도로 인해 원하는 유전자를 많은 copy로 복제할 수 있다. 또한 플라스미드를 통하여 원하는 유전자의 기능이나 단백질 기능을 연구할 수 있다. 따라서 플라스미드의 정제는 대부분의 분자생물학 실험실에서 유용하게 쓰는 실험 방법이다. 플라스미드 정제 방법에는 여러 가지가 있지만, 기본적으로 다음과 같은 공통된 과정들을 포함한다. 정제하고자 하는 플라스미드를 가진 박테리아의 세포벽을 깨고, 큰 chromosomal DNA와 단백질들을 제거한 뒤, 남아있는 플라스미드 DNA의 농도를 높이는 것이다. 이러한 alkaline lysis는 1979년 Birnboim and Dolly에 의해 개발되었으며, 보통 Birny나 miniprep으로 불려진다. 이러한 과정을 통해 상대적으로 적은 부피이지만, 높은 농도의 플라스미드 DNA를 뽑을 수 있으며, 제한 효소 처리하기에 좋은 상태의 DNA를 제공해준다.

참고자료

· 최영길 편저 / 1993 / 임상분자생물학기법 / 고려의학 / 1판 / p29
· 양재섭 외 공역, 2005,필수유전학, 제3판, 월드사이언스
· Purves ․ Sadava ․ Orians ․ Heller, 2004, Life, 7th edition, courier company