[생화학 실험] DNA 제한효소 절단 및 확인 예비+결과

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목차

1. 제목
2. 날짜
3. 예비퀴즈
4. 참고문헌
5. 결과
6. 토의

본문내용

1. 제목: 제한효소 처리 / 전기영동
2. 날짜: 2021.05.07.
3. 예비퀴즈
1) DNA전기영동 시 EtBr을 사용하여 DNA를 염색시킨다. EtBr 사용 시 주의할 점에 대해 작성하시오.
EtBr은 dsDNA사이에 삽입되기 때문에 DNA의 biological process에 영향을 끼쳐 DNA를 변형시킬 수 있으며, 발암물질이기 때문에 사용상에 주의를 기울여야 한다. 눈에 자극을 줄 수 있고 호흡기관이나 피부를 자극하는 물질로 알려져 있어 사용할 때는 반드시 장갑을 착용해야 하며 폐기물을 처리하는 과정도 조심스럽게 이루어져야 한다.

2) DNA 제한효소의 종류를 3가지 이상 작성하시오.
HindIII, EcoRI, BamHI (2형 제한효소): 4-8개의 뉴클레오티드로 구성된 palindromic sequence를 인식해 DNA를 절단한다.
HindIII: 5‘-AAGCTT-3’/3’-TTCGAA-5’
EcoR1: CTTAA↓G/ G↓AATTC
BamH1: G↓GATCC/CCTAG↓G

3) 아가로스젤을 만들 때 아가로스의 함량이 높을수록 작은 크기의 DNA를 비교할 수 있다. (O)
Agarose gel은 농도가 높으면. Agarose 섬유 밀도가 높아지기 때문에 pore의 크기가 작아져 pore를 통과하기 힘들기 때문에 비교할 수 있는 DNA의 크기가 작아진다.

4) 제한효소처리 시 주의할 점에 대해 작성하시오.
DNA methylase 유전자를 갖고이쓴 균으로부터 조제한 DNA는 염기의 일부가 메틸화되어있어 해당 서열을 인식 절단하는 제한효소를 사용하여도 거의 절단되지 않는다.
제한효소의 star 활성: 기질이 되는 DNA에 대해 특정한 반응조건 하에 사용하면 특이성이 저하되어 본래의 인식서열과 다른 염기서열을 절단하는 경우가 있다.
효소 단백질 자신이나 다른 단백질이 DNA에 결합하고 있는 경우 DNA가 gel 속으로 들어가지 않거나 DNA가 EtBr에 염색되지 않아 agarose gel 전기영동시에 밴드가 확인되지 않거나 밴드의 퍼짐현상이 일어나며, 밴드의 이동도에 오류가 발생할 수 있다. SDS등의 변성제를 시료에 첨가하여 개선할 수 있다.

참고 자료

없음