Bacterial transformation and plasmid purification

소개

Bacterial transformation and plasmid purification

competent E.coli cell을 이용하여 BMP4 유전자가 삽입된 재조합 plasmid를 형질전환 하였고 형질전환 여부를 X-gal plate를 이용한 Blue/White screen으로 확인하는 실험. 제한효소를 처리한 군과 처리하지 않은 군으로 나눠 전기영동을 한후 BMP4 유전자가 올바르게 삽입되었는지 확인한다.

목차

0. Abstract
Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials and Methods
1. 첫째 날
(1) LB/Amp broth 제조
(2) LB/Amp agar plate 제조
(3) 색깔 선별용 Agar plate 만들기 (X-gel과 IPTG가 함유한 agar 배지)
(4) Competent E.coli cell의 제조
(5) 형질전환
(6) 균 접종
2. 둘째 날
3. 셋째 날
(1) 제한효소 처리
(2) 전기영동
Ⅲ. Results
1. X-gal plate를 이용한 Blue/White screen 결과
2. 제한효소 처리 후 전기영동 결과

Ⅳ. Discussion


Ⅴ. Reference 7

본문내용

Abstract
Bacteria 간 유전물질 교환 중의 한 가지 방법인 형질전환(transformation) 과정을 competent E.coli cell을 이용하여 수행하였다. E.coli에 BMP4 유전자가 삽입된 재조합 plasmid를 형질전환 하였고 형질전환 여부를 X-gal plate를 이용한 Blue/White screen으로 확인하였다. 재조합 plasmid에 원하는 DNA가 제대로 삽입되었는지 여부를 확인하기 위해 EcoRI 제한효소를 처리한 군과 처리하지 않은 군으로 나눠 전기영동을 하였고, 그 결과 형질전환 된 white colony에 BMP4 유전자가 올바르게 삽입되었음을 알 수 있었다.

Ⅰ. Introduction

형질전환(transformation)은 bacteria 간에 유전물질을 상호 교환하는 하나의 방법으로써 첫 번째로 밝혀진 방법이다. 이것은 bacteria가 주변 환경으로부터 naked DNA를 받아들이는 과정을 의미하는데, 형질전환은 접합(conjugation)에서와 같이 세포와 세포 사이의 접촉이나 박테리오파지와 같은 형질도입(transduction)이 필요하지 않다. 형질전환에서는 주변 환경으로부터 DNA를 받아들 수 있도록 자연적인 수용능력을 갖춘 competent cell로써 하나의 세포를 필요로 하거나, 여러 단계의 물리적 조작에 의해 인위적으로 DNA를 받아들일 수 있도록 수용 능력을 갖춘 세포를 필요로 한다. 현재는 생명공학의 발달과 더불어 간단한 기술로도 새로운 유전자를 다양한 bacteria에 도입할 수 있게 되었다.
우리는 이번 실험을 통해 인위적인 형질전환 기법을 이용하여 형질전환을 시켜 보고, 형질전환된 bacteria가 자랄 수 있는 selective media를 이용하여 형질전환 된 bacteria를 screening 하는 기법을 알아보도록 한다.

참고자료

· 1. Nancy Trun, Janine Trempy, Fundamental Bacterial Genetics 1st edition, 2004.
· 2. 실험생화학, Korean society of medical biology and molecular biology 5th edition, 2006.
· 3. 생화학 실습서