생물공학실습 대장균 형질 전환 및 클론 확인 E.coli transformation DXS pBS-SK(+)

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2017.06.10
최종 저작일
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목차

1. 서 론

2. 실험 방법
2.1 DNA Gel Purification
2.2 DNA Ligation
2.3 LB-Ampicillin, IPTG, X-Gal 평판배지 제조
2.4 형질전환과 배양 확인
2.5 plasmid 분리
2.6 제한효소 절단
2.7 전기영동 및 band의 존재 및 양 확인

3. 결과 및 고찰
3.1 DNA Gel Purification 및 Ligation
3.2 클로닝 선별배지의 제조
3.3 대장균의 형질전환과 colony 확인
3.4 전기영동 결과

본문내용

1. 서 론
단백질이나 핵산 등의 고분자물질은 하전을 띄므로 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 매질(겔)에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법을 전기영동(electrophoresis)이라 한다. 분리하고자 하는 물질의 크기와 성질에 따라 다른 종류의 gel이 사용되는데 DNA를 비롯한 핵산의 분리에는 보통 agarose gel이 이용된다. Agarose는 홍조류인 우뭇가사리의 세포벽에서 추출한 다당류인 한천성분으로 고온에서는 녹지만 실온으로 돌아오면 고체상태가 된다. Agarose를 이용하여 약 100bp~20,000bp 사이의 DNA를 분리할 수 있다.
DNA는 전체 분자에 음전하를 가지고 있는 분자이다. DNA의 서열은 동일한 phosphate backbone의 연결로 이루어져 있으므로, 모든 DNA 조각은 동일한 전하/질량비를 가진다.
단백질과 마찬가지로 DNA도 전기영동에 의한 분석이 유용하게 사용될 수 있다. 그러나 DNA 전기영동과 단백질의 전기영동은 차이가 있다.

참고 자료

김미광 ( Mi Kwang Kim ). 2002. 플라스미드 DNA로 대장균 형질전환시 회복단계의 필요여부에 관한 연구. 구강생물학연구, 26(2): 297-304
실험생화학 개정3판, 한국생화학회, 1997. pp. 329-336.
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